胸腹水细胞块切片结合免疫组化在病理诊断中的应用体会
【摘要】 目的：探讨胸腹水细胞块切片结合免疫组化在病理诊断中的应用价值。方法：收集临床送检的139例胸腹水标本行常规细胞涂片检查，选择常规细胞涂片疑似恶性胸腹腔积液标本22例制作细胞沉渣切片，行HE常规染色和免疫组化染色。结果：22例疑为恶性胸腹水标本进行离心沉渣包埋及借助免疫组织化学染色，诊断腺癌13例，鳞状细胞癌3例，小细胞癌2例，恶性间皮瘤1例，恶性淋巴瘤1例，反应性间皮细胞2例。细胞块切片HE染色细胞丰富密集，染色分明，结构清晰，具有一定的组织结构。免疫组织化学染色阳性信号定位准确，对比度好，背景干净。结论：细胞沉渣石蜡切片及免疫组化技术与常规胸腹水脱落细胞学检查相结合可有效提高胸腹水病理诊断的准确率，提高肿瘤细胞诊断的阳性率，值得临床推广。
【关键词】 免疫组化染色； 胸腹水； 细胞学检查
中图分类号 R361 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2014)35-0083-02
, 百拇医药
胸腹腔积液在临床中较为常见，产生机制十分复杂，判定其良恶性对疾病的诊断、治疗和预后有重要意义。胸腹水脱落细胞学检查是临床诊断的重要方法，但单纯细胞形态学不能提供像组织学一样准确的病理诊断，因而给正确诊断带来困难。笔者所在科室利用细胞块与免疫组化技术和常规胸腹水脱落细胞学检查相结合，能够提高细胞病理诊断的准确率，为临床诊断和治疗提供依据，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 材料
收集笔者所在医院2013年6月-2014年8月临床送检的139例胸腹水标本，均为自浆膜腔抽取的新鲜液体。其中男88例，女51例，年龄18～72岁。
1.2 方法
1.2.1 常规细胞涂片 送检的139例胸腹水标本中，每例标本100 ml左右，阴凉处静置5 min，取自然沉淀标本50 ml置于离心管中，2500 r/min的速度离心10 min，吸出上清液。取沉淀物涂片，95%乙醇固定10 min，苏木素染色3 min，1%盐酸酒精分化5 s，流水返蓝5 min，伊红染色5 s，水洗1次，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片[1]。涂片由两位高年资细胞病理医师进行形态学观察，根据细胞形态、核不典型性和黏附性分为良性、恶性。
, 百拇医药
1.2.2 细胞沉渣切片制作 选择常规细胞涂片疑似恶性胸腹腔积液标本22例，将常规细胞学检查剩余的细胞学标本移入20～50 ml离心管，2500 r/min×10 min，离心后用吸管吸掉上清液，向含沉淀物的离心管内加入10%中性福尔马林20 ml，放入振荡仪振荡10 min，随后再离心10 min，弃上清液，用镊子取出沉淀物，用擦镜纸包好，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。有些胸腹水中含血性成分较多，加入冰醋酸与乙醇混合液20 ml(25%乙醇95 ml，冰醋酸5 ml)，混合后再离心。
1.2.3 免疫组化染色 免疫组化采取EnVision两步法，按照试剂说明书严格操作。检测TTF-1、CK7、CR、Villin、CEA、EMA、CA125、Vim、mesothelial等表达。石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗2～3次各2 min，高压抗原修复，3%H2O2室温孵育10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗2～3次各5 min；滴加正常山羊血清封闭液，室温10 min，滴加Ⅰ抗，4 ℃过夜。阴性对照用PBS代替Ⅰ抗。滴加Ⅱ抗，DAB显色，苏木素复染。盐酸乙醇分化，切片脱水、透明、封片、镜检。同时设立阴性和阳性对照。
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2 结果
对22例疑为恶性胸腹水标本进行离心沉渣包埋及借助免疫组织化学染色，诊断结果：腺癌13例，鳞状细胞癌3例，小细胞癌2例，恶性间皮瘤1例，恶性淋巴瘤1例，反应性间皮细胞2例。细胞块切片常规HE染色，切片中细胞丰富密集，染色分明，细胞结构清晰，具有一定的组织结构。免疫组织化学染色阳性信号定位准确，对比度好，背景干净，见图1～图6。
3 讨论
胸腹水脱落细胞学检查因方法简单、操作简易、经济快速并且患者痛苦少，在临床工作中应用广泛。常规胸腹水脱落细胞学涂片检查阳性率较低，一些病例难以确定其组织来源。对于典型的细胞能较准确地诊断，但有时炎性胸腹水增生、退变的间皮细胞在形态上与某些恶性细胞，尤其是腺癌细胞易于混淆，增加了诊断的困难。
细胞块切片可作为传统细胞涂片的有效辅助方法，而应用胸腹水细胞块结合免疫组化方法更能补充常规细胞涂片的不足[2]。胸腹水细胞沉渣石蜡切片技术操作简便，既提高胸腹水标本的阳性诊断率，也进一步提高细胞学的诊断率[3]。细胞沉渣石蜡包埋后，可像常规活检组织块一样连续切片；细胞比较集中，可减少遗漏；蜡块制出的切片可减少因涂片过厚而导致的细胞重叠、细胞成团、结构不清等现象；不会出现掉片现象，染色定位准确、可靠，背景清晰，易于作出准确诊断；胸腹水沉渣蜡块可反复连续切片，根据诊断需要可进行细胞化学染色、免疫组化染色以至原位核酸分子杂交染色等[4-5]。
, 百拇医药
综上所述，细胞沉渣石蜡切片及免疫组化技术与常规胸腹水脱落细胞学检查相结合可有效提高胸腹水病理诊断的准确率，提高肿瘤细胞诊断的阳性率，值得临床推广。
参考文献
[1]中华医学会.临床技术操作规范病理学分册[M].北京：人民军医出版社，2007：1-6.
[2] Kulkarni M B，Desai S B，Ajit D，et al.Utility of the thromboplastin-plasma cell-block technique for fine-needle aspiration and serous effusions[J].Diagn Cytopathol，2009，37(2)：86-90.
[3]杨小苗，申成香，司有谊，等.胸腹水细胞沉渣石蜡切片技术的应用[J].临床与实验病理学杂志，2014，30(8)：934-935.
[4]张玉文.胸腹水恶性肿瘤病理细胞学检查分析[J].中国医学创新，2012，9(9)：11-12.
[5]吴玉梅，艾春富.三种细胞学检测方法对胸腹水定性分析的鉴别[J].中国医学创新，2011，8(11)：120-121.
(收稿日期：2014-08-18) (编辑：欧丽), 百拇医药(李红华 刘平 李丹)
【关键词】 免疫组化染色； 胸腹水； 细胞学检查
中图分类号 R361 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2014)35-0083-02
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胸腹腔积液在临床中较为常见，产生机制十分复杂，判定其良恶性对疾病的诊断、治疗和预后有重要意义。胸腹水脱落细胞学检查是临床诊断的重要方法，但单纯细胞形态学不能提供像组织学一样准确的病理诊断，因而给正确诊断带来困难。笔者所在科室利用细胞块与免疫组化技术和常规胸腹水脱落细胞学检查相结合，能够提高细胞病理诊断的准确率，为临床诊断和治疗提供依据，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 材料
收集笔者所在医院2013年6月-2014年8月临床送检的139例胸腹水标本，均为自浆膜腔抽取的新鲜液体。其中男88例，女51例，年龄18～72岁。
1.2 方法
1.2.1 常规细胞涂片 送检的139例胸腹水标本中，每例标本100 ml左右，阴凉处静置5 min，取自然沉淀标本50 ml置于离心管中，2500 r/min的速度离心10 min，吸出上清液。取沉淀物涂片，95%乙醇固定10 min，苏木素染色3 min，1%盐酸酒精分化5 s，流水返蓝5 min，伊红染色5 s，水洗1次，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片[1]。涂片由两位高年资细胞病理医师进行形态学观察，根据细胞形态、核不典型性和黏附性分为良性、恶性。
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1.2.2 细胞沉渣切片制作 选择常规细胞涂片疑似恶性胸腹腔积液标本22例，将常规细胞学检查剩余的细胞学标本移入20～50 ml离心管，2500 r/min×10 min，离心后用吸管吸掉上清液，向含沉淀物的离心管内加入10%中性福尔马林20 ml，放入振荡仪振荡10 min，随后再离心10 min，弃上清液，用镊子取出沉淀物，用擦镜纸包好，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。有些胸腹水中含血性成分较多，加入冰醋酸与乙醇混合液20 ml(25%乙醇95 ml，冰醋酸5 ml)，混合后再离心。
1.2.3 免疫组化染色 免疫组化采取EnVision两步法，按照试剂说明书严格操作。检测TTF-1、CK7、CR、Villin、CEA、EMA、CA125、Vim、mesothelial等表达。石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗2～3次各2 min，高压抗原修复，3%H2O2室温孵育10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗2～3次各5 min；滴加正常山羊血清封闭液，室温10 min，滴加Ⅰ抗，4 ℃过夜。阴性对照用PBS代替Ⅰ抗。滴加Ⅱ抗，DAB显色，苏木素复染。盐酸乙醇分化，切片脱水、透明、封片、镜检。同时设立阴性和阳性对照。
, http://www.100md.com
2 结果
对22例疑为恶性胸腹水标本进行离心沉渣包埋及借助免疫组织化学染色，诊断结果：腺癌13例，鳞状细胞癌3例，小细胞癌2例，恶性间皮瘤1例，恶性淋巴瘤1例，反应性间皮细胞2例。细胞块切片常规HE染色，切片中细胞丰富密集，染色分明，细胞结构清晰，具有一定的组织结构。免疫组织化学染色阳性信号定位准确，对比度好，背景干净，见图1～图6。
3 讨论
胸腹水脱落细胞学检查因方法简单、操作简易、经济快速并且患者痛苦少，在临床工作中应用广泛。常规胸腹水脱落细胞学涂片检查阳性率较低，一些病例难以确定其组织来源。对于典型的细胞能较准确地诊断，但有时炎性胸腹水增生、退变的间皮细胞在形态上与某些恶性细胞，尤其是腺癌细胞易于混淆，增加了诊断的困难。
细胞块切片可作为传统细胞涂片的有效辅助方法，而应用胸腹水细胞块结合免疫组化方法更能补充常规细胞涂片的不足[2]。胸腹水细胞沉渣石蜡切片技术操作简便，既提高胸腹水标本的阳性诊断率，也进一步提高细胞学的诊断率[3]。细胞沉渣石蜡包埋后，可像常规活检组织块一样连续切片；细胞比较集中，可减少遗漏；蜡块制出的切片可减少因涂片过厚而导致的细胞重叠、细胞成团、结构不清等现象；不会出现掉片现象，染色定位准确、可靠，背景清晰，易于作出准确诊断；胸腹水沉渣蜡块可反复连续切片，根据诊断需要可进行细胞化学染色、免疫组化染色以至原位核酸分子杂交染色等[4-5]。
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综上所述，细胞沉渣石蜡切片及免疫组化技术与常规胸腹水脱落细胞学检查相结合可有效提高胸腹水病理诊断的准确率，提高肿瘤细胞诊断的阳性率，值得临床推广。
参考文献
[1]中华医学会.临床技术操作规范病理学分册[M].北京：人民军医出版社，2007：1-6.
[2] Kulkarni M B，Desai S B，Ajit D，et al.Utility of the thromboplastin-plasma cell-block technique for fine-needle aspiration and serous effusions[J].Diagn Cytopathol，2009，37(2)：86-90.
[3]杨小苗，申成香，司有谊，等.胸腹水细胞沉渣石蜡切片技术的应用[J].临床与实验病理学杂志，2014，30(8)：934-935.
[4]张玉文.胸腹水恶性肿瘤病理细胞学检查分析[J].中国医学创新，2012，9(9)：11-12.
[5]吴玉梅，艾春富.三种细胞学检测方法对胸腹水定性分析的鉴别[J].中国医学创新，2011，8(11)：120-121.
(收稿日期：2014-08-18) (编辑：欧丽), 百拇医药(李红华 刘平 李丹)