1.1 SK-BR-3-TR细胞的制备及稳定培养

    SK-BR-3细胞系来自美国ATCC公司，曲妥珠单抗(Trastazumab)来自中国上海罗氏制药有限公司。采用间隙大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法，诱导建立曲妥珠单抗耐药SK-BR-3-TR细胞模型，具体如下：(1)取处于对数生长期SK-BR-3-TS细胞，在完全培养基中加入0.5 μg/ml(约10倍的50%抑制浓度)曲妥珠单抗，直至细胞能在0.5 μg/ml曲妥珠单抗条件下稳定生长;(2)之后逐步增加药物浓度，使细胞依次在0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 μg/ml曲妥珠单抗环境下稳定生长和传代;(3)诱导细胞在8 μg/ml曲妥珠单抗环境下稳定生长和传代1个月后，获得SK-BR-3-TR细胞;(4)之后将SK-BR-3-TR细胞在含4.0 μg/ml完全培养基中培养。整个耐药诱导时间约7个月。

    1.2 SK-BR-3-TR细胞的鉴定

    MTT法检测不同浓度曲妥珠单抗干预下SK-BR-3-TS和SK-BR-3-TR细胞增殖能力。(1)种板：取对数生长期SK-BR-3-TS和SK-BR-3-TR细胞 ......