简小兰，曾普华，杜佳，何凤姣，李克雄，蒋益兰

    1.湖南省中医药研究院附属医院，湖南长沙410006；2.中医肿瘤学湖南省重点实验室，湖南长沙410006；3.湖南中医药大学，湖南长沙410208

    结直肠癌(Colorectal cancer)在全球的发病率及死亡率均处于第3位。近年来随着医疗技术的发展，在早期诊断方面有所进展，仍有1/3的患者在确诊时已发现转移[1-2]，5年总体生存率低于50%[3]。引起结直肠癌患者死亡的主要原因——侵袭及转移[4-5]，积极探索复发转移机制并进行阻断是提高结直肠癌患者生存率的关键。大量的临床研究均显示中医药在结直肠癌的综合治疗中发挥重要作用[6-8]。中医药具有抗肿瘤、抗复发转移、调节免疫力、提高生活质量、延长生存期等作用。多年的临证研究证实，健脾消癌方抗结直肠癌术后复发转移具有良好疗效[9-12]，但其机制尚未完全阐明。本研究从癌细胞迁移、侵袭力方面，运用血清药理学方法研究健脾消癌方对结肠癌细胞迁移及侵袭作用的影响，进一步探讨健脾消癌方抗复发转移疗效机制，为临床应用提供科学依据。

    1 材料

    1.1 动物和细胞株SD大鼠购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，体质量(200±20)g，雌雄各半，合格证号:SYXK(湘)2015-008。人结肠癌细胞株HCT116购买于中国科学院细胞库，编号TCHu 99。

    1.2 药物健脾消癌方主要药物是人参10 g，薏苡仁30 g，重楼10 g，半枝莲30 g，郁金15 g，莪术10 g，从湖南省中医药研究院附属医院中药房购买。取上述2倍量药物，用水浸泡1 h，水量超出药物3～5 cm，大火煮沸后转小火煎30 min，过滤，药渣按前法再煎煮2次，将3次药液混匀、过滤，减压浓缩为相当于生药1.5 g·mL-1，4℃保存，1周内用完。

    1.3 试剂与仪器胎牛血清(以色列Biological industries公司，批号:1616316)；DMEM培养基(美国Hyclone公司，批号:NZD1131)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司，批号:P0012)；RIPA裂解液(上海碧云天生物技术有限公司，批号:P0013b)；结晶紫(上海碧云天生物技术有限公司，批号:C0121)；MMP-2(美国Abcam公司，货号:ab92536)；MMP-9(美国Abcam公司，货号:ab228402)；β-actin(美国Abcam 公司，货号:ab6276)；山羊抗兔IgG(康为世纪生物科技有限公司，货号:01325)；山羊抗小鼠IgG(康为世纪生物科技有限公司 ......