李曼，齐大明，王鑫源，李询，邢冰，杨朝帆，董诚明

    河南中医药大学，河南郑州450046

    牛膝(Achyranthes bidentata B1.)为苋科牛膝属多年生草本植物，以干燥根入药，为常用大宗药材品种之一，主产于河南温县、河南武陟、内蒙古赤峰、河北安国等地，有较高的药用价值和经济价值，繁殖方式主要是种子繁殖，种子分为秋子和蔓薹子。现有研究表明，不同产地牛膝在化学成分含量方面存在差异[1-4]。近年来，对于牛膝的研究也多集中在化学、药理等方面[5-9]，关于分子标记研究牛膝遗传多样性及遗传结构的报道较少[10-11]。与其他分子标记技术相比，简单序列重复区间扩增多态性分子标记(intersimple sequence repeat，ISSR)具有稳定、多态性高、简便及易操作等优点，被视为理想的遗传标记方法[12]。目前ISSR已在多种动植物的亲缘关系、种质鉴定等研究方面得到应用[13]。本研究应用ISSR分子标记法，分析不同产地牛膝的遗传多样性及亲缘关系，对牛膝规范化种植及资源开发等方面提供科学依据。

    1 实验材料

    1.1 实验药材采集内蒙古、河北、河南等地的牛膝种子；牛膝经河南中医药大学董诚明教授鉴定为苋科植物牛膝(Achyranthes bidentata B1.)。采集信息见表1。

    表1 采集信息表

    1.2 实验仪器NanoDropTMOne超微量紫外分光光度计(美国赛默飞公司)；超低温冰箱(青岛海尔股份有限公司)；C1000 TouchTM梯度PCR仪(美国伯乐公司)；JW-2018H冷冻高速离心机(安徽嘉文仪器装备有限公司)；DYCP-31E型琼脂糖凝胶电泳仪(北京市六一仪器厂)；GelDoc XR+凝胶成像仪(美国BIO-RAD公司)；LDZM-80KMS型立式蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)；BCD-215KS型冰箱(青岛海尔股份有限公司)；迷你掌上离心机(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；微量移液枪(德国艾本德有限公司) ......