杜兵强，张伟霞，张连平

    郑州市第六人民医院，河南 郑州 450000

    骨肉瘤是一种原发性骨肿瘤，青少年是其高发人群，发病率高，每万人中有2～3例发病，由于其恶性程度高、复发率和病死率高，给患者带来巨大威胁[1]。目前，手术辅助化疗是骨肉瘤主要治疗手段，患者预后保肢率及存活率均得到有效提高，但仍有部分患者治疗效果不佳，出现骨转移，预后较差[2]。因此，探索新的、有效治疗骨肉瘤的药物对改善患者预后、延长生存期有重要意义。随着对恶性肿瘤研究的不断深入，中药在抗肿瘤及辅助治疗肿瘤方面愈来愈受到人们重视。唇形科植物夏枯草最早记载于《神农本草经》，具有清肝名目、消肿、软坚散结的功效[3]。关于其抗乳腺癌[4-5]、肝癌[6-7]效果已得到证实，但其对骨肉瘤的抑制作用鲜有研究。鉴于此，本研究通过建立骨肉瘤S180荷瘤小鼠，探讨夏枯草是否能通过调控骨代谢经典代谢通路OPG/RANK/RANKL发挥抑瘤作用。

    1 材料

    1.1 动物和细胞系60只SPF级健康昆明小鼠，雌雄各半，6周龄，体质量18～22 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2018-0004，饲养于12 h/12 h明暗交替、23～25 ℃、湿度50%～60%的条件下，伦理学批号20200701；S180骨肉瘤细胞株，购自中国科学院上海生命科学研究院，货号：BS-C64870058。

    1.2 药物和试剂夏枯草干燥果穗购自长沙高桥药材市场，经中国医学科学院药物植物研究所鉴定为唇形科夏枯草属植物夏枯草(PrunellavulgarisL)，粉碎加入10倍蒸馏水，加热回流提取4次，合并提取液并进行减压浓缩、冷冻干燥后备用。环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：160613)；吖啶橙溴乙锭(AO/EB)双荧光染色试剂盒(上海远慕生物科技有限公司，货号：YM-S1403)；逆转录试剂盒(苏州宇恒生物科技有限公司，货号：R2028)；BCA蛋白定量分析试剂盒(美国Bio-rad公司，货号：LIT33)；兔抗人OPG、RANK、RANKL抗体(美国Abcam公司，货号分别为：ab73400、ab193713、ab216484)；二抗(美国Abcam，货号：ab203061)。

    1.3 仪器TCS SP8 X型激光共聚焦显微镜(德国Leica公司)；Synergy H4 Hybrid酶标仪(美国Bio-Tek公司)；9700实时荧光定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)；ChemiDoc XRS型化学发光成像分析系统(Bio-rad公司) ......