马霜，向亮亮，文佩宇，刘延庆

    扬州大学医学院，江苏 扬州225009

    胃癌(gastric cancer，GC)是世界上最致命的恶性肿瘤之一，在众癌症中发病率排第五，病死率排第三。除非在早期发现，否则很难通过手术、化疗和放疗等方法治愈[1]。患者局部复发或远处转移，或在肿瘤播散时确诊为胃癌，生存期很少超过12个月，5年生存期小于10%[2]。肿瘤细胞的侵袭和转移是影响胃癌治疗的最主要原因之一[3]。因此，抑制胃癌的转移过程是胃癌治疗的重要环节。目前，普遍认为基质金属蛋白酶[4](matrix metalloproteinases，MMPs)及上皮间质转化[5](epithelial-mesenchymal transitions，EMT)等是包括胃癌在内的多种恶性肿瘤获得侵袭转移能力的重要调节因素，已成为抗肿瘤药物研究的重要方向。南蛇藤为卫矛科南蛇藤属植物，具有清热解毒的功效。课题组前期研究发现，南蛇藤乙酸乙酯提取物(celastrus orbiculatus extracts，COE)有显著的抗肿瘤活性，可抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭转移、血管生成[6-7]及促进凋亡[8]。但COE抑制胃癌MKN45细胞侵袭转移的研究及内在可能分子机制还未清楚，在国内外未见报道。本研究拟探讨COE对人胃癌细胞MKN45侵袭和迁移的影响及其可能的作用机制。

    1 材料

    1.1 细胞人胃癌MKN45细胞株(中科院上海细胞库)。

    1.2 药物与试剂南蛇藤(广州致信药业有限公司，批号：070510)；5-氟尿嘧啶注射液(5-fluorouracil，5-fu)(上海旭东海普药业有限公司，批号：170724)。RPMI 1640培养基(Gibco公司，批号：12633012)；胎牛血清(Gibco公司，批号：10099-141)；胰酶细胞消化液(碧云天公司，批号：C0201)；MTT粉剂(美国Sigma公司，批号：M2128)；Matrigel胶(北京索莱宝科技有限公司，批号：M8370)；MMP-2、MMP-9、EMT、Ras、Raf、MEK、ERK、β-actin(美国CST公司，货号分别为：4022S、3852S、9782S、3339S、9422S、4694S、4695S、4970S)；增强型化学发光试剂盒(英国Amersham Life Science公司，货号：RPN2232)。

    1.3 仪器Heracell 150i型CO2培养箱(美国Thermo公司)；MSC1.2型生物安全柜(美国Thermo公司)；EnSpire型多功能酶标仪(美国PerkinElmer公司)；电泳槽、凝胶成像分析仪(美国Bio-Rad公司)；倒置荧光显微镜(日本Olympus公司) ......