王兰英，孙吉利，苏家茹

    青岛市市立医院，山东 青岛 266011

    乳腺癌的发病率和死亡率在女性恶性肿瘤中位于首位，全球每年约有40多万人因乳腺癌死亡[1]。我国乳腺癌发病率呈现逐年上升趋势，且发病趋于年轻化[2]。目前对乳腺癌的治疗以手术为主，但乳腺癌细胞通常通过血液和淋巴结迁移扩散至全身，给治疗带来困难[3]。由于肿瘤具有异质性，不同阶段乳腺癌患者对药物选择存在差别，因此，常存在治疗后肿瘤细胞未完全清除的情况，造成治疗失败。此外，肿瘤细胞耐药性也是影响治疗效果的重要因素[4]。因此，研发新的治疗方案，提高乳腺癌治疗效果显得尤为重要。鸡血藤作为我国传统药材，具有补血活血、通络强筋等功效。研究发现，鸡血藤总黄酮具有干扰肿瘤细胞周期、抑制肿瘤细胞转移的作用，但其作用机制未完全明确[5]。Wnt/β-catenin通路对细胞生长发育严格精准调控，但当其过度活化时则会导致肿瘤的生成。已有研究证实，Wnt/β-catenin通路的异常调控可导致肺癌、前列腺癌、直肠癌、肝癌等[6-9]。本实验基于对Wnt/β-catenin通路的调控作用研究鸡血藤总黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。

    1 材料

    1.1 细胞人乳腺癌细胞株MCF-7(武汉尚恩生物技术有限公司，批号：190351)，保存于-80℃冰箱。

    1.2 药物与试剂阿霉素(山东西亚化学工业有限公司，纯度≥99.0%，货号：A16278)；芦丁(北京中科质检生物技术有限公司，货号：202597)。DMEM培养基、胎牛血清(美国Gibco公司，货号：11054020、16140071)；乳酸脱氢酶染色液(四唑盐法)(北京百奥莱博科技有限公司，货号：GL0510)；吉姆萨染液试剂盒(北京雷根生物技术有限公司，货号：DM002)；RNA提取试剂盒(上海东寰生物科技有限公司，货号：M00501)；Trizol、反转录试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司，货号：15596018、K1691]；RT-qPCR试剂盒(美国赛默飞公司，货号：AB4105A)；蛋白裂解试剂盒(上海江林生物科技有限公司，货号：P1160)；Wnt1、β-catenin、Cyclin-D1、c-Myc、MMP-7、β-catenin磷酸化一抗(上海信裕生物科技有限公司，货号：xy-WNTi-Hu、xy-E11315、xy-E10333、xy-1732R、xy-0423R、xy-2063R)；β-actin一抗、辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔二抗(美国Cell Signaling Technology公司 ......