李芝明，付胜奇，刘变化，刘欣

    1.郑州人民医院，河南 郑州 450053； 2.郑州大学附属郑州中心医院，河南 郑州 450007

    脑出血是脑卒中的一种，世界范围内每年发病人数约为200万，致死率、致残率极高，严重影响患者的生命健康及生存质量[1]。目前关于脑出血的治疗以服用降颅压、降血压、控制脑水肿等药物为主，但缺乏针对性治疗手段，多数患者仍存在神经功能缺损[2-3]。研究发现，脑出血发生后，神经元细胞继发性持续死亡是导致神经功能缺损的重要因素，而小胶质细胞自噬是神经元细胞继发性持续死亡的主要形式，同时也是影响神经功能恢复的重要因素[4]。因此，寻找有效抑制小胶质细胞自噬的药物对临床治疗脑出血有重要意义。近年来，中医药在治疗脑出血疾病中发挥重要作用。中医认为脑出血的病因为瘀热阻窍，故治疗以活血散热、散瘀止痛为主[5-7]。石菖蒲为天南星科植物，具有醒神益智、降火清痰、保护心肌细胞的功效。研究证实，石菖蒲有减轻脑出血后细胞肿胀，减轻脑水肿，保护脑组织的作用[8]，但关于石菖蒲脑保护的作用机制仍需要进一步探讨。研究表明，趋化因子受体4(chemokine receptor 4，CXCR4)-磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)信号通路在小胶质细胞自噬过程中起重要调控作用[9]。因此，本研究建立脑出血大鼠模型，观察石菖蒲通过CXCR4-PI3K信号通路对模型大鼠小胶质细胞自噬的影响及神经保护作用，为临床治疗脑出血疾病提供参考。

    1 材料

    1.1 动物健康雄性SD大鼠，8周龄，50只，体质量250～300 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SYXK(京)2018-0086。

    1.2 药物与试剂石菖蒲萃取物(长沙华康生物技术开发有限公司，粉末状，批号：180507)。水合氯醛(广州市虎傲化工有限公司，货号：302-17-0)；多聚甲醛、氨水、二甲苯、乙醇、戊二醛、柠檬酸铅(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：C104190、A299541、X139941、E111994、G105907、L303843)；苏木精染液、伊红染液(德州润昕实验仪器有限公司，批号：180201、180604)；磷酸缓冲液(美国Sigma公司，货号：P5368-10PAK)；醋酸双氧铀(海德创业生物科技有限公司，货号：HD28000)；10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 U·mL-1链霉素(美国Hyclone公司，货号：SH30088.02、SV30010、SV30079.01)；总RNA提取试剂盒(Trizol法)(美国Invitrogen公司 ......