张琼，刘培强，王娅囡，张奇志，贾艳敏，刘畅，弓韬

    1.山东省立第三医院，山东 济南 250031； 2.山西医科大学第一医院，山西 太原 030001

    在肿瘤疾病中，肝癌是死亡率相对较高的疾病，全球疾病死亡人数中约有43%的人为肝癌患者，对人们的生命安全造成了严重的威胁[1-3]。癌细胞的转移、侵袭过程十分复杂，与各种细胞因子、黏附相关分子、调节因子、信号转导通路等密切相关[4-6]。目前，肝癌治疗仍以手术切除最常见，虽然术后进行放疗、化疗等治疗，但复发和转移风险依旧存在[7]。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)等炎性因子主要由T 细胞等免疫细胞产生，这些炎性因子参与肝癌细胞的增殖、转移过程，与肝癌的发生发展密切相关[8]。大量研究表明，TNF-α在细胞增殖、分化及凋亡方面发挥着重要作用，对转基因肝癌小鼠的TNF-α信号通路进行研究，发现其在肝癌组织中异常激活，并促进了肝癌细胞的增殖及转移[9]。白花丹属于蓝雪科植物中的一种常见中药，具有破瘀消积、行气止痛等功效。现代药理学研究表明，白花丹具有抗凝血、抗癌、抗氧化及保肝等作用[10]。研究发现，从白花丹中提取的白花丹醌在抗肿瘤方面具有显著作用，且不良反应少，明显提高了患者的生存质量[11]，但其具体作用机制的研究还处于起步阶段，白花丹醌能否通过阻断TNF-α信号的激活治疗肝癌还有待考察。由此，本文采用人肝癌细胞进行研究，探讨白花丹醌能否通过调控 TNF-α 水平对肝癌细胞活性和炎症因子产生影响。

    1 材料

    1.1 细胞系人肝癌细胞Hep G2(上海雅吉生物科技有限公司，货号：ZQ0022)，将细胞密封保存于-20 ℃冰箱中备用。

    1.2 药物与试剂白花丹醌(滁州仕诺达生物科技有限公司，货号：SND-1261，纯度：≥98%)。Trizol试剂(雷根生物科技有限公司，货号：NR0002)；SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒(江苏凯基生物科技发展有限公司，货号：KGP113)；逆转录试剂盒(上海研卉生物科技有限公司，货号：FSQ-301)；RT-PCR试剂盒(美国ABI公司，货号：7000)；胰蛋白酶(上海宝曼生物科技有限公司，货号：E0022)；MTT粉、BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京伊塔生物科技有限公司，货号：YT1466、YT8173)；TNF-α及β-action的引物序列由赛默飞世尔科技有限公司合成；RPMI-1640培养基、TNF-α一抗、IL-1β一抗及IL-6二抗(武汉益普生物科技有限公司 ......