王宪赟，黄芳，张小鹿，王怡

    上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海 200437

    糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的三大微血管并发症之一，是导致终末期肾病的主要原因之一，目前尚无有效方法干预其进展。研究证实，肾小球内皮细胞损伤在DN的发生发展中起重要作用[1]。肾小球内皮细胞结构比较特殊，与一般的毛细血管内皮细胞不同，它具有特殊的窗孔、基底膜和糖萼。作为肾小球滤过屏障的一个关键组成部分，肾小球内皮细胞承载着更高的血流压力，因此更容易受到损伤；其次，肾小球内皮细胞与系膜细胞和基底膜紧密相连，因此肾小球内皮细胞的损伤可能引起系膜细胞的病变[2]。

    我科前期研究发现，糖尿病大鼠微血栓形成与纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein2，fgl2)凝血酶原酶mRNA高表达有关，益肾泄浊方可通过降低DN大鼠肾脏局部Fgl2凝血酶原酶，改善肾脏微循环，有效控制血肌酐水平。该方是本科长期应用治疗慢性肾衰的经验方，对原发病是糖尿病的患者疗效更佳。既往研究证实，糖尿病大鼠肾小球内皮细胞可见fgl2凝血酶原酶的阳性表达，且与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)密切相关[3]。因此，本研究选择高糖环境下培养的人肾小球内皮细胞，用不同浓度益肾泄浊方含药血清干预，通过检测干预前后肾小球内皮细胞的增殖情况、TNF-αmRNA、fgl2凝血酶原酶mRNA等指标，观察益肾泄浊方对高糖环境下内皮细胞的保护作用及相关机制，并探讨肾小球内皮细胞免疫凝血机制，证实微型癥积是导致DN内皮损伤的关键环节，为DN的中西医结合治疗提供更多理论依据。

    1 材料

    1.1 实验细胞与动物人肾小球内皮细胞(human renal glomerular endothelial cells，HRGECs)(美国ScienCell研究实验室，目录号：4000)。SPF级雄性SD大鼠20只，体质量(200±15)g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，实验动物使用许可证编号：SYXK(沪)2016-0004，实验前适应性饲养1周。

    1.2 药物与试剂益肾泄浊方颗粒剂(黄芪20 g，生地黄10 g，淫羊藿10 g，太子参10 g，酒黄精10 g，红花12 g，烫水蛭6 g，熟大黄12 g，江阴天江药业有限公司，批号：1603028、1604121、1603134、1603038、1602113、1602110、1510136、1512126) ......