时明伟，蒋西玲，史智君，王孟雨，陈新旺

    1.河南中医药大学第三附属医院，河南 郑州 450008；2.南阳市第二人民医院，河南 南阳 473000；3.河南省人民医院，河南 郑州 450008；4.河南中医药大学，河南 郑州 450046

    目前，因社会节奏、生活压力等诸多问题，失眠已成为最常见的睡眠障碍之一，影响从儿童到老年各个年龄阶段的人。研究表明，至少33%的成年人出现间歇性失眠症状，10%～22%的成年人有慢性睡眠困难[1-3]。失眠的特点是难以入睡、难以保持睡眠、整晚频繁醒来、醒来无法再入睡、睡眠无法恢复等，常合并有心血管疾病或抑郁、焦虑等情绪障碍。长时间的失眠状态还会导致认知、社交和身体机能的下降，增加工作事故，甚至有自杀倾向[4-5]。因此，失眠的机制研究及适宜干预方法的探讨是临床研究的重点。

    睡眠是一个周期性的、节律性的复杂生理过程，由自身生物钟和机体平衡机制严格调控，睡眠/觉醒周期与神经元突触结构和生理变化密切相关，脑内的相关神经递质通过调节神经元活动来控制睡眠与觉醒[6]。研究表明，下丘脑小分子神经肽可能在维持睡眠觉醒的触发开关中具有重要作用[7-8]，参与睡眠-觉醒的调节。Orexin觉醒纤维最重要的作用是维持觉醒，当其功能被抑制时，则觉醒减少，睡眠增加[9]，反之则会维持觉醒状态。艾灸疗法在临床治疗失眠中效果显著，且当艾灸使用量增加时效果尤甚[10-11]。本研究通过采用重灸法来观察下丘脑组织中Orexin-A蛋白表达的变化情况，以阐述重灸在失眠治疗中的作用及对Orexin-A表达的影响，为进一步探讨灸法在治疗失眠中的作用机制提供依据。

    1 材料

    1.1 动物SPF级雄性SD大鼠40只，体质量(200±10)g，山东鲁抗医药股份有限公司提供，生产批号：SCXK(鲁)-20140007。大鼠饲养于河南中医药大学动物实验中心，自由摄取食物和水，室温22℃，湿度20%～30%，12 h/12 h明暗交替。

    1.2 药物与试剂对氯苯丙氨酸(美国Sigma公司，批号：SHBH7873)；兔抗大鼠Orexin-A多克隆抗体、生物素标记山羊抗兔IgG(武汉博士德生物工程有限公司 ......