潘姣，张晓雨，孙光军，2，林爱珍，2

    1.湖北中医药大学，湖北 武汉 430061；2.湖北省中医院，湖北 武汉 430061

    便秘是一种常见的消化系统疾病，一般表现为排便困难或排便次数减少、粪便质地干硬或伴有排便不尽感[1]。流行病学调查显示，我国成人慢性便秘的患病率为4%～10%[2]，以中老年女性为主。由于本病发病机制复杂、病程持久的特点，严重影响了患者的生活质量。其中刺激性泻药会损害肠道神经，渗透性泻药容易引起电解质代谢紊乱，甚至发生心血管等不良事件[3]。水通道蛋白(aquaporins，AQPs)是一类具有高度选择性的跨膜通道[4]，主要用于调节细胞内和细胞间水流的作用[5]。结肠上皮细胞AQPs表达的失调是便秘的发生的重要因素，Spearman等级相关系数证实粪便含水量与AQPs表达之间存在显著相关性[6]。近年来，中医药治疗便秘具有独特优势，湖北省中医院林爱珍教授以《温病条辨》中增液汤为基础自拟验方缩泉润肠方临床治疗老年功能性便秘疗效显著[7-9]，为证实该验方的通便作用与水通道蛋白的相关性，本实验拟从结肠黏膜水通道蛋白AQP3、AQP8、AQP9进一步探讨缩泉润肠方治疗老年性便秘的作用。

    1 材料

    1.1 动物24月龄SPF级SD大鼠50只，雌雄各半，体质量(280±20)g，由湖北省疾病预防控制中心提供，合格证号：SCXK-(鄂)2008-0005。所有大鼠单笼单只独立饲养，室内温度保持21～25 ℃、相对湿度保持45%～60%，每10 h通风换气1次，24 h 自由饮水。本动物实验通过湖北中医药大学伦理实验委员会和国家实验动物使用法批准。伦理批号：SYXK2019-0002。

    1.2 药物及试剂缩泉润肠方(颗粒剂)：山药、益智仁、生白术、玄参各20 g，火麻仁、当归各15 g，麦冬、乌药、生地各12 g，杏仁10 g等10味中药对应生药量的三九散装免煎颗粒(湖北省中医院药学部)；乳果糖口服溶液(Abbott Healthcare Products B.V.进口药品注册证号：H20120387)；复方地芬诺酯片(河南鼎昌药业有限公司，国药准字：H22022037)；阿拉伯树胶(泰安市利达胶业有限公司,货号：ZY-1033)；苏木素—伊红染色液(北京索来宝生物科技有限公司,货号：G1120)；RNA提取液Trizol(美国Invitrogen公司,货号：15596026)；cDNA Synthesis试剂盒(美国Fermentas公司,货号：K1622)；2×Taq PCR MasterMix试剂盒(北京天根生化科技有限公司,货号：KT201)；50×TAB电泳液(北京索来宝生物科技有限公司,货号：T1060)；琼脂糖(西班牙Biowest Agarose公司,货号：111860)；DEPC水(北京拜尔迪生物技术有限公司,货号：46-000) ......