周颖，刘蕾，袁柳媚，蒋佳，马雁鸿，陈成，潘江，石文英，章薇，娄必丹

    1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007

    随着全世界人口老龄化程度日益加深，脑中风成为我国乃至世界面临的重大公共卫生问题之一[1-2]。近年来兴奋性神经毒性作为导致脑缺血后脑细胞坏死与凋亡的重要始因，已成为重点研究方向之一[3]。有文献报道，电针可抑制脑组织缺血区胞外兴奋性氨基酸水平，调控N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartic Acid，NMDA)受体不同亚基表达水平，降低细胞内Ca2+浓度，拮抗缺血导致的兴奋性神经毒性，促进神经功能恢复[4-5]。D-丝氨酸(D-serine，D-Ser)作为NMDA受体重要的协同激动剂，通过与NMDA受体亚单位NR1亚基位点结合，参与兴奋性神经毒性[6-7]。研究表明，电针心包经穴具有促进脑缺血后神经修复的作用[8-9]。本课题组前期表明，电针局灶性脑缺血损伤模型大鼠心包经、肺经后，大鼠缺血侧脑组织 D-Ser 含量、NR1蛋白表达下降[10-11]，神经功能缺损症状明显改善，提示电针心包经穴可能对 D-Ser、NR1表达具有调节作用，而脑缺血后不同时期的神经损伤呈现不同程度的变化。故本研究拟进一步探讨电针心包经穴在局灶性脑缺血后不同时相点(1 d、3 d、7 d、14 d、21 d)调控脑缺血损伤模型大鼠缺血侧脑组织D-Ser含量、NR1蛋白表达的作用。

    1 材料

    1.1 动物SPF级SD雄性大鼠，体质量280～300 g，120只，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物许可证号：SCXK(湘)2016-0002。安静环境下饲养，室温22～26 ℃，相对湿度50%～70%。

    1.2 试剂甲醇(美国Thermo Fisher公司，货号：67-56-1)；乙腈(美国Thermo Fisher公司，货号：75-05-8)；甲酸(美国Sigma Aldrich公司，货号：67-56-1)，乙酸(美国Sigma Aldrich公司，货号：75-05-8)；D-Ser(美国Sigma Aldrich公司，货号：312-84-5)；硼酸缓释液(美国Sigma Aldrich公司)；BCA蛋白定量试剂盒(康为世纪生物有限公司，货号：CW0014S)；丙烯酰胺(阿拉丁，货号：J173005)；Marker(美国Thermo Fisher公司，货号：#26617)；PVDF膜(美国Millipore公司，货号：IPVH00010)；一抗：Rabbit Anti NR1(江苏新科生物研究中心有限公司 ......