王倩，陈亭亭，王守梅，张树辉

    上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海 200437

    原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤及第2位致死肿瘤，严重威胁人民的生命安全和健康，其中75%～85%原发性肝癌为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，常由慢性乙型或丙型肝炎病毒感染所致[1]。大多数HCC在中晚期才被确诊，选择合理和规范化的多学科综合治疗可获得最佳疗效[2]。肝癌以气血亏虚为本，肝失疏泄为基本病机，气血湿热瘀毒互结为标，蕴结于肝，渐成症积，HCC不同病期分别采用疏肝理气、活血化瘀、清热解毒等扶正祛邪、标本兼治的辨证论治法恢复肝主疏泄之功能，使气血流畅，祛湿热瘀毒之邪，对控制症状、提高免疫力、预防复发转移及提高生存质量等优势明显。以往研究显示，清热解毒药半枝莲在原发性肝癌的治疗中使用频率较高[3-5]。半枝莲为唇形科黄芩属植物半枝莲的全草，具有清热解毒、散肿消痈等功效。药理学及临床研究表明，半枝莲及其活性成分具有良好的抗肿瘤作用，常用于肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、结直肠癌等恶性肿瘤的治疗[6-9]。本研究采用高、低转移性HCC细胞系MHCC-97H和MHCC-97L探究半枝莲乙醇提取物对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用，并分析其作用机制。

    1 材料

    1.1 动物及细胞株SPF级4周龄雄性BALB/c裸鼠16只，体质量18～20 g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号：20180003007216。所有小鼠均饲养于恒温(25±2) ℃，湿度50%～ 60%的SPF环境中，高压灭菌后的水和饲料随意进食。所有实验方案均按照实验动物治疗和使用委员会的指南进行，并获得上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院伦理委员会批准，伦理批准号：YYLAC-2019-036-4-2。人高、低转移性HCC细胞株MHCC-97H和MHCC-97L购自北京北纳创联生物技术研究院。

    1.2 试剂半枝莲(产地：浙江，上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科，货号：0306901)；5-氟尿嘧啶(美国MCE公司，货号：HY-90006，规格：1 g/瓶)；DMEM高糖型培养基(美国Hyclone公司，货号：SH30243.01)；胎牛血清(美国GIBCO公司，货号：16000-044)；青链霉素混合液、结晶紫、RNase A(北京索莱宝科技有限公司，货号：P1400-100、C8470、R8020-25)；CCK-8 试剂盒(美国Signalway Antibody公司，货号：CP002)；BCA蛋白定量试剂盒(美国Thermo Fisher Scientific公司 ......