武瑞臣,崔书伟,李双庆

    1.邯郸中心医院,河北 邯郸 056000; 2.冀中能源峰峰集团总医院邯郸院区,河北 邯郸 056000;3.沧州市中心医院,河北 沧州 061000

    股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)是临床常见骨科疾病,多发于20～50岁青中年,发病隐匿且进展极快,临床表现为髋部及腹股沟疼痛[1]。激素类药物因其较强的抗炎及免疫抑制作用,被广泛应用于多种疾病的临床治疗,但会导致机体代谢紊乱、痤疮、多毛、高血压、骨质疏松等副作用的出现,其中激素性股骨头坏死(steroid induced osteonecrosis of the femoral head,SONFH)是其最严重的副作用之一。我国是SONFH发病大国,因滥用激素引发的SONFH占ONFH 25%以上[2]。目前,治疗SONFH方式多样,通常采用口服抗凝及抗骨质疏松药物、中药敷贴及手术髓芯加压治疗,但治疗周期长、疗效欠佳、治疗费用过高[3]。牛膝甾酮是从传统中药牛膝中提取的甾酮类物质,具有抗炎、抗病毒、调节机体免疫、延缓衰老等多种生物医学功能[4]。研究表明,牛膝甾酮可提高软骨细胞增殖活性,从而治疗骨关节炎[5]。然而,目前关于牛膝甾酮用于SONFH治疗的报道甚少。本研究通过建立SONFH大鼠模型,观察牛膝甾酮对SONFH大鼠骨髓间充质干细胞(bone manrrow mesenchymal stemcells,BMSC)自噬及成骨分化的影响,以期为临床应用提供实验基础。

    1 材料

    1.1 实验动物SPF级SD大鼠10只,雄性,6周龄,体质量(200±20) g,购自上海茂生衍生物科技有限公司,生产许可:SCXK(沪)2017-0004。大鼠购入后于通风环境中饲养,保持温度(24±2) ℃、相对湿度50%～60%,给予充足饮水和饲料,12 h/12 h 光照黑暗交替,适应性饲养1周。本研究经邯郸中心医院动物伦理委员会审批通过。

    1.2 药物与试剂醋酸泼尼松龙注射液(华中药业股份有限公司,国药准字H42021216,规格:0.125 g);牛膝甾酮(纯度≥98%,上海泽叶生物科技有限公司);LipofectamineTM3000试剂(美国invitrogen公司,货号:L3000008);miR-98-5p mimics及其阴性对照(negative control,NC)(上海拓然生物科技有限公司);双荧光素酶检测试剂盒(上海联迈生物工程有限公司,货号:LM130595-100);2×SYBR Green PCR Mastermix和二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,货号:SR1110、 PC0020);茜素红染色试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司,货号:KFS128);兔抗大鼠CD29、CD34、CD45、CD44、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2 interaction protein 1,CKIP-1)一抗(美国genetex公司,货号:GTX128839、GTX02602、GTX65913、GTX102111、GTX31722、GTX00949、GTX85240) ......