赵新新,黄雪君,2,3,甘海宁,2,3,肖观林,2,3,赵自明,2,3

    1.广州中医药大学,广东 广州 510405; 2.广东省第二中医院,广东 广州 510095; 3.广东省中医药研究开发重点实验室,广东 广州 510095

    血瘀证指血液运转不畅,或血流瘀滞,或血溢脉外而停蓄于体内所引起的以疼痛、肿块、出血、面色或唇舌紫黯或发绀、脉涩或结代为主要表现的证候[1],是冠心病、脑卒中、肿瘤、糖尿病等疾病病理发展的重要环节[2]。中医认为,热毒之邪可煎熬血液,灼伤脉络,血液妄行,出血留著或血溢于脉外,遂成瘀血[3]。热毒血瘀证则伴随着血瘀、炎性因子含量上升等临床病理表现[4]。丹参味苦,性微寒,具有凉血消肿、活血化瘀、清心除烦等效用,常用于活血化瘀[5]。目前,尚未发现有丹参抗热毒血瘀药效和代谢机制研究的报道。

    代谢组学通过检测生物体在不同干预条件的特定时间段,全面、系统观察和分析内源性代谢物的整体性变化,以识别生物代谢标志物,阐明代谢通路和代谢机制,筛选早期诊断指标,揭示疾病靶点、发病机制和药物毒性及其机制[6],其研究模式与中医药整体观相契合,适用于证候本质及证候疗效评价研究[7]。代谢物的选择包括尿液、粪便、细胞、血清等,有研究发现热毒血瘀大鼠出现便溏、二便失禁、尿液减少等病理表现[4],为减少实验过程中样本收集不全、样本污染等情况对结果的干扰,本文采用血清代谢组学探究血清中的差异代谢物变化,以期从代谢水平探讨热毒血瘀证的代谢本质及丹参配方颗粒抗热毒血瘀证的药效和代谢调控机制。

    1 材料

    1.1 动物SPF级健康雄性SD大鼠36只,180～220 g,6～8周龄,购自广东省实验动物中心,实验动物生产许可证号:SCXK(粤)2018-0002,动物合格证编号:No.44007200027077。动物饲养于广东省中医药工程技术研究院SPF级动物实验室,环境设施使用许可证号:SYXK(粤)2020-0059,相对湿度40%～60%,室温20～25 ℃,大鼠自由饮食水。该实验经广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院)动物伦理委员会批准,伦理审批号:048921。

    1.2 药物与试剂丹参配方颗粒(批号:1050933)、丹参饮片(与丹参配方颗粒采用同一批次丹参,临用前按参考文献[8]所述制成标准汤剂),均由广东一方制药有限公司提供。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、角叉菜胶(美国Sigma-Aldrich公司,批号:12181202、20230705);水合氯醛(成都市科龙化工试剂厂,批号:2016092910);凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)测定试剂盒(上海长岛生物技术有限公司产品,批号:210705002、210900200、Y211019-2);白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)、血栓素B2(thromboxane B2,TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-ketone-prostaglandin 1α,6-keto-PGF1α)试剂盒(天津安诺瑞康生物技术有限公司产品,批号:370211109、569211109、277200816、544211109、107211109);HE染液(广州优迪生物科技有限公司产品,批号:0314A20) ......