郭莉琛,杜鑫苑,许海英,梁冰,张彤,袁庆,胡利民

    天津中医药大学中医药研究院/组分中药国家重点实验室/天津市中药药理学重点实验室/方剂学教育部重点实验室,天津 301617

    缺血性脑卒中是临床常见的一种卒中类型,具有发病率高、致残率高、病死率高的特点[1]。目前,缺血性脑卒中的治疗方法主要为药物溶栓和机械取栓,但伴随着治疗窗窄、出血并发症风险高等限制因素,因此,探索新的有效缓解脑缺血损伤的药物成为当务之急。中药红花是菊科植物红花的干燥花,性辛、温,归心、肝经,具有活血通经,散瘀止痛之效[2]。现代药理研究表明,羟基红花黄色素A作为中药红花的主要活性成分,在调节氧化应激、炎症反应、糖脂代谢、血管功能方面发挥重要作用,在治疗心脑血管疾病方面有广阔的应用前景[3-6]。X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族中抑制Caspase 活性能力最强的因子,是调节细胞凋亡的重要蛋白[7]。研究表明,XIAP参与凋亡、自噬、焦亡等多种细胞程序性死亡方式的调节[8-10]。缺血性脑卒中发生后,由于供血不足能量代谢异常引发的一系列级联反应造成细胞大量死亡,因此,细胞凋亡机制的调节对疾病的治疗有重要意义[11]。目前,内源性XIAP在缺血性脑卒中中的细胞凋亡调节机制尚不明确。本文以细胞凋亡为出发点,研究羟基红花黄色素A对脑缺血后XIAP蛋白的调节作用及细胞凋亡的影响,以探讨羟基红花黄色素A治疗缺血性脑卒中的可能机制。

    1 材料

    1.1 动物75只SPF级Wistar雄性大鼠,体质量250～280 g,购自北京维通利华实验动物公司,许可证号:SCXK(京)2021-0006,饲养于天津中医药大学实验动物中心,自由进食进水,室温20～25 ℃,相对湿度56%～60%。动物实验获得天津中医药大学伦理委员会批准(审批号:TCM-LAEC2022119)。

    1.2 药物与试剂羟基红花黄色素A(广州悦康生物制药有限公司,规格:25 mg/瓶,批号:200901);B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)抗体、Bcl-2同源二聚体X(Bcl-2-Associated X,Bax)抗体、β-actin抗体(英国Abcam公司,货号:ab196495、ab199677、ab179467);Caspase-3抗体(美国Cell Signaling Technology公司,货号:9662S);XIAP抗体(美国Bioworld公司,货号:CAS75122);HE染色试剂盒及Nissl染色试剂盒、RIPA裂解液(北京索莱宝科技有限公司,货号:C0105、G1430、R0020);TUNEL凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司,货号:C1088);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)测试盒(羟胺法)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)测定试剂盒(TBA法)(南京建成生物工程研究所,货号:A001-1、A003-1);2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC,美国Sigma-Aldrich公司,货号:T8877) ......