任周新

    河南中医药大学中医药科学院/呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心,河南 郑州 450046

    MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]法是一种检测细胞增殖和活性的方法,在中草药活性成分的体外筛选中应用广泛。MTT法的检测原理为:在细胞培养环境中加入MTT,活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH) 还原MTT,形成水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒,而死细胞无此功能;加入二甲基亚砜溶解甲瓒,检测吸光度值,以该值反映样品活细胞数量[1-2]。灵敏度高、操作简单和经济性好的优点是这种方法得以广泛应用的原因,但这种方法也有一定的局限,如不能用于某些活性药物分子的检测[3-8]。本文就MTT法在中草药活性成分的应用和局限进行概括和总结。

    1 常用的MTT方法

    体外培养的细胞,按照是否能贴附于支持物上生长的性质,分为悬浮型和贴壁型两大类。这两类细胞的MTT操作步骤存在差异。

    贴壁细胞:向细胞培养液中加入MTT溶液,继续培养一段时间。然后终止培养,加入二甲基亚砜溶液,震荡溶解甲臜,最后检测液体的吸光度。需要注意的是,某些测试的中药化合物分子,本身带有颜色,需要清除这种干扰。可以在加入MTT前,吸弃含药培养液,用PBS或单纯培养液冲洗细胞2～3遍,再加入MTT液。悬浮细胞:在培养液中加入MTT溶液,培养一定时间后,离心,除去上清,加入二甲基亚砜,最后检测吸光度。WST-8[2-(2-Methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium Sodium Salt]是一种水溶性四唑盐,为MTT的优化产品 ......