何江龙,牟文荣,张童童,纪宝玉,3,裴莉昕

    1.河南中医药大学药学院,河南 郑州 450046; 2.河南省道地药材生态种植工程技术研究中心,河南 郑州 450046;3.天津大学药物科学与技术学院,天津 300072

    地黄为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的新鲜或干燥块根,具有清热凉血、滋阴生津等功效,其化学成分主要含有环烯醚萜类、三萜类、木脂素类、黄酮类、酚酸类等[1]。地黄道地产区为河南焦作(古怀庆府),是著名的“四大怀药”之一,也是六味地黄丸等诸多中成药的要药。地黄的炮制品被收录于药品及保健品目录中,地黄相关的保健品、功能食品等较多,但地黄酵素等生物发酵制品的研究少见,以地黄为原材料,通过酵母菌和乳酸菌的双重发酵制作酵素不但能够解决新鲜地黄不易贮存的问题,还能缩短发酵时间提升口感[2-3],同时作为一种新型饮片的新兴态势,具有一定的研究意义和实用价值。

    传统酵素中含有丰富的多糖、酚酸、氨基酸、蛋白质等活性成分,在医疗保健中应用广泛[4-5]。吕明珊等[6]、李相禹等[7]以总酚酸为指标,以桑葚、猕猴桃为原料进行响应面分析得到桑葚和猕猴桃的最佳发酵工艺条件。地黄中所含的酚酸是一类含有酚环的有机酸,是广泛存在于自然界生物体内的天然功能性高分子化合物[8],具有极强的自由基清除能力和抗氧化功能[9-10],可延缓机体衰老、预防心血管疾病,具有抗炎、抗肿瘤、抗溃疡等功效[11-12]。

    本文以四大怀药中的地黄为原料,在单因素实验基础上,通过研究地黄酵素发酵过程中多酚含量的变化,对影响制备地黄酵素工艺的各因素进行Box-Behnken实验设计和响应面优化,以期获得地黄酵素发酵的最佳工艺,为新型中药制剂地黄酵素的开发与利用提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 药材与试剂实验材料采集于河南省焦作市沁阳陈庄村,经河南中医药大学董诚明教授鉴定为玄参科植物地黄的新鲜块根;酵母菌:安琪酵母股份有限公司;嗜酸乳杆菌:北京北纳创联生物技术研究院;MRS琼脂、MRS肉汤、YPD液体培养基、蔗糖:北京索莱宝科技有限公司。没食子酸标准品、葡萄糖标准品:上海源叶生物科技有限公司;福林酚、茚三酮、Na2CO3、NaNO2、Al(NO3)3:麦克林生物科技有限公司;乙腈、甲醇、磷酸:赛默飞世尔科技有限公司。

    1.2 仪器与设备洁净工作台SW-CJ-1FD(苏州安泰空气技术有限公司);高压蒸汽灭菌锅 KG-AP40M(KAGOSHIMA SEISAKUSYO INC);电子分析天平 FA2004N-01156(上海民桥精密科学仪器有限公司);高速冷冻离心机JW-3021HR(安徽嘉文仪器装备有限公司);精密台式pH计FE28(海梅特勒-托利多仪器有限公司);多功能微孔板读数仪VLBL0TD0(河南德信汇仪器设备有限公司)、高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司) ......