罗进辉,童运涛,张慧,范倩倩,吕彬

    1.武汉科技大学附属汉口医院,湖北 武汉 430012; 2.华润武钢总医院,湖北 武汉 430080

    肾缺血再灌注损伤(renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)是临床常见的急性损伤性疾病之一,肾移植、肾结石切除术、部分肾脏切除术等外科手术中肾脏血流量被阻断均可引起RIRI[1],该病致死率较高,且增加了患慢性肾病和终末期肾病的风险,影响全球30%～80%的肾移植患者[2]。氧化应激反应、细胞因子释放、活性氧生成和毒物积累均是导致RIRI发病的危险因素,而这些病理生理反应均会引起肾小管上皮细胞损伤,导致细胞死亡[3]。最新的研究表明,铁死亡等细胞程序性死亡参与RIRI的发生发展过程[4]。与常见的细胞凋亡、细胞自噬等过程不同,铁死亡作为铁离子依赖的细胞氧化性死亡方式,主要发生在线粒体中,影响细胞内脂质氧化代谢功能[5]。虫草素是从传统中药野生蛹虫草中提取的天然活性物质,《新华本草纲要》记载:“蛹草性平,味甘,有补精髓,益肺肾,止咳化痰之功效。”虫草素作为虫草属真菌的主要成分,现代药理研究发现其具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、神经保护和肾脏保护等生物活性,在多种炎症性疾病和氧化应激损伤疾病中发挥重要调节作用[6-7]。然而,目前尚不清楚虫草素在RIRI铁死亡中的作用和相关机制。基于此,本次研究采用虫草素处理RIRI模型大鼠观察其对大鼠肾脏组织损伤及铁死亡的影响,探讨其可能存在的机制,旨在为虫草素应用于RIRI疾病的临床治疗提供实验依据。

    1 材料

    1.1 动物24只雄性SD大鼠购自湖北省实验动物研究中心,均为6～8周龄,体质量为180～220 g,饲养于空气湿度为50%,相对温度为23 ℃条件下,给予充足的饮用水和食物,适应性喂养1周后。本研究经武汉市汉口医院伦理委员会审批通过,伦理编号:hy11202114。

    1.2 药物与试剂虫草素(上海懋康生物科技有限公司,货号:MS0075);铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(美国selleck生物科技有限公司,货号:S7243);铁离子比色法检测试剂盒(Abcam公司,货号:ab83366);二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein acetoacetate,DCFH-DA)培养液(西安百萤生物科技有限公司,货号:15204);谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(recombinant solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1,FTH1)、长链脂酰辅酶A合成酶4(long chain acyl CoA synthase 4,ACSL4)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 1,NOX1)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX2)一抗(山羊抗小鼠IgG抗体,美国Thermo Fisher Scientific公司,货号:MA5-32827、711589、701934、PA5-27137、PA5-27882、PA5-88606、MA5-14568)及相应二抗(Abcam公司,山羊抗小鼠IgG抗体,美国Thermo Fisher Scientific公司,货号:MA5-32827、711589、701934、PA5-27137、PA5-27882、PA5-88606、MA5-14568);ECL显色发光剂(福州奥研实验器材有限责任公司,CAS号:BL523B) ......