赵若岚,董盛,宋亚刚,权伟,马善波

    1.陕西中医药大学第一临床医学院,陕西 咸阳 712046; 2.河南中医药大学,河南 郑州 450046;3.空军军医大学第一附属医院,陕西 西安 710032

    抑郁症属于中医“郁证”范畴,郁证主要是由情志不舒、气机郁滞引起的,以心情抑郁、情绪不宁、胸部满闷或易怒易哭等为主要表现[1]。名老中医李可辨治郁证,从中医阴阳观出发,运用《伤寒杂病论》经典方剂四逆汤,形成系统的治疗方案。四逆汤由甘草(炙)、干姜、附子(生用,去皮)三味药组成,基于此方,逐日增加附子用量,即可有效缓解抑郁症状[2-3],但其药效物质基础和作用机制尚不清楚。

    中药药效物质是指能够反映中药临床疗效的化学成分群。这些成分是中药在进入机体后,作用于多个靶点并产生整体治疗效果的化学组分[4]。虚拟筛选和分子对接技术能够将已知的小分子活性物质与相关靶蛋白进行对接,从而在分子层面阐明中药效应成分与靶标之间的作用机制。目前,这项技术在揭示中药药效物质基础与心血管疾病、癌症等众多疾病的病理机制方面都发挥重要作用[5]。

    药物靶点是药物发挥治疗作用的生物大分子,其中蛋白质是最重要的药物靶点[6]。目前,临床上使用的抗抑郁药物主要是基于“单胺神经递质假说”而研发,包括选择性5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)再摄取抑制剂、选择性去甲肾上腺素(norepinephrine,NA)再摄取抑制剂、选择性NA/5-HT再摄取抑制剂以及单胺氧化酶抑制剂(monoamine oxidase inhibitor,MAOI)等[7]。这些靶点不仅是抗抑郁药物的“可成药”靶点,也是研究相对成熟的靶点。中药作用靶点的发现对于阐明中药的作用机制具有重要意义。

    因此,本研究首先检索四逆汤的化学成分,并结合类药五原则、口服生物利用度等参数进行筛选。然后,采用Discovery StudioTM2016软件,对化合物与抗抑郁药物作用靶点进行分子对接,探索两者的亲和力与结合模式。最后,采用小鼠海马神经元细胞系HT22细胞和小鼠抑郁模型,观察四逆汤活性成分的抗抑郁作用,初步阐明四逆汤抗抑郁的药效物质基础。

    1 材料

    1.1 动物清洁级健康C57BL/6雄性小鼠,体质量(20±1) g,购自陕西中医药大学实验动物中心,实验动物生产许可证号:SCXK(陕)2021-001,实验动物使用许可证号:SYXK(陕)2021-001。本实验经陕西中医药大学实验动物伦理委员会批准,伦理审批编号:SUCMDL20230620003 ......