摘要：目的： 探讨5-Aza-CdR对人胃癌细胞p16基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法： 体外培养人胃癌细胞株MKN-28，分别用0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L的5-Aza-CdR与之孵育72h。甲基化特异性PCR检测处理前后p16基因启动子甲基化水平。RT-PCR和Western blot检测p16 mRNA表达。结果： 随着药物浓度的增加，甲基化p16含量逐渐降低。而非甲基化p16逐渐增高。此外，5-Aza-CdR处理后，p16 mRNA和蛋白表达水平也随之增高。结论： 5-Aza-CdR可逆转MKN-28细胞株细胞中基因甲基化修饰状态，并上调其表达。

    关键词：5-Aza-CdR；肝癌细胞；RASSFIA基因；启动子甲基化

    资助项目：湖南省教育厅科技计划项目(13C963)

    胃癌是一种恶性肿瘤，它严重危害着人们的身心健康，给胃癌患者带来了很大的身体危害及心理压力[1]。故本次研究利用5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞株MKN-28的p16基因启动子区进行去甲基化反应，进一步探讨胃癌细胞中p16基因失活的机制以及5-Aza-CdR对其表达的调控作用。

    1材料与方法

    1.1主要试剂

    5-Aza-CdR为Sigma产品，总RNA提取试剂为TRIzol，买自Invitrogen公司 ......