时间分辨荧光免疫测定技术在乙肝两对半定量检测中的临床意义以及酶联免疫法与时间分辨法的比较分析(2)
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【Key words】hepatitis B two-time-resolved immunoassay technology enzyme-linked immunosorbent assayHepatitis B
国内临床实验室最常用的乙型肝炎病毒感染者的血清学标志物主要依靠ELISA法，而且酶联免疫法应用最广。但受方法学本身的限制，它可能作为阴阳性判断，不能判断乙肝两对半具体含量，它不能完成HBV感染的动力学观察，而TRFIA是80年代初发展起来的一项超微量免疫分析技术，由于采用了稳定的稀土元素标记和增强液的放大效应，最大限度地提高了检测地灵敏度，在特异性和稳定性及测量自动化方面显示其优越性[1]，是替代放免分析的方法之一。时间分辨荧光技术的出现，其灵敏度高，特异性强，对于乙肝两对半定量检测，能够准确及时敏感地反应患者体内的乙型肝炎病毒标志物的含量。本文采用TRFIA法对360例炎患者血清标本进行HBV-M含量检测，并与ELISA法两者进行了比较分析，现报告如下，仅供参考。
1材料与方法
1.1检测对象：血标本均来自我院2005年11月~2006年11月之间门诊及住院病人360例，无性别和年龄区别，早晨空腹抽取静脉血，及时分离血清-20℃冷冻保存待检。
1.2检测试剂：ELISA试剂盒由英科(厦门)新创有限责任公司提供，时间分辨免疫荧光测定HBV-M试剂盒由广州丰华生物工程有限公司提供。
1.3检测仪器：泰莱一I时间分辨荧光免疫分析仪，DEM-III型自动酶标洗板机，FWZ-I微量振荡器。
1.4方法：ELISA法与TRFIA法测定HBV-M，操作严格按说明书进行，同时加入相应的质控物监测。
ELISA法主要步骤有：加样，孵育，洗板，加酶或底物，显色，比色，其中抗-HBc测定按1∶30稀释。
TRFIA法主要步骤有：加样，振荡，洗板，加配好的标记物工作液，振荡，洗板，加增强液振荡后上机检测，测定过程在30分钟内进行，其中抗-HBc测定按1∶30稀释。
1.5质控物有广州丰华生物工程有限公司提供。
1.6统计学分析：采用配对X2检验。
2结果
2.1时间分辨免疫荧光分析法检测乙型肝炎标志物结果见表1(X±S)
3讨论
我国是乙型肝炎患者的大国，HBV在人体内的复制量，患者机体的免疫状态和治疗效果等，一直是医生和患者十分关注的问题。近年来人们逐渐认识到TRFIA法在乙肝两对半定量检测对乙肝临床诊断具有一定的临床意义。TRFIA法检测HBV-M与ELISA法相比其特异性和敏感性都高，特别是能够检测低浓度的HBsAg和HBeAg，减少HBe感染漏诊和误诊具有较高的价值，因HBsAg阳性是HBV感染的金标准[2]。本研究发现，在360例乙型肝炎两对半检测中，两种方法通过对比发现，TRFIA法的灵敏度明显高于ELISA法，对HBsAg弱阳性的标本，ELISA法检测不到时，TRFIA法仍可以检出，且HBsAg的浓度处在一个较低的浓度范围内(0.5~10ng/m1)。另外，研究还发现用ELISA法检测抗-HBc这一项阳性时，用TRFIA法检测HBsAg，有的也可以检测出阳性，其浓度出在一个较低的范围内。对ELISA法检测HBsAg，抗-HBc两项均阳性的患者，TRFIA法检出抗-HBe也为阳性，这可能是由于方法学不同造成的。在HBV标志物的检测中，HBeAg，抗-HBe是一对比较重要的指标。由于临床上抗病毒核酸药物的广泛应用，会发现一些患者在治疗中HBeAg浓度降低出现HBeAg，抗-HBe同时阳性或HBeAg阴转，抗-HBe阳性，当检测方法的灵敏度不够时，会漏掉一些HBV低水平复制的阳性患者。HBV标志物检测是诊断乙型肝炎的必备手段，而病毒指标检测的标准直接关系到患者的诊断，合理用药和有效治疗[3]。TRFIA是一种能定量检测HBV标志物，特异性及灵敏度较高的一种新的检测方法，它的灵敏度高于ELISA法，可以检出低水平复制的标本，避免漏检，可以解决隐源性肝炎HBV标志物的诊断难题。在抗-HBV治疗过程中常会发生HBeAg向抗-HBe血清学转化，出现HBeAg和抗-HBe同时阳性或HBeAg阴转，抗一HBe低水平阳性，对低水平复制HBeAg，抗一HBe定量分析，对临床治疗及疗效观察有参考价值[4]。
TRFIA的另一优点是它的线性范围比较宽，方便进行定量。这对观察病人的感染进展情况，对治疗有无应答可得到最直接的变化数据。对临床来说，表面抗原，表面抗体和核心抗体的定量更为重要。另外，本研究还发现，大部分ELISA法检测为HBsAg.抗-HBc阳性模式的患者其实为HBeAg假阴性及抗-HBe假阴性，仅少部分可能为病毒变异的结果。研究发现ELISA法易出现假阴性。随着仪器和试剂的国产化，检验费用的降低，TRFIA因其突出的高敏感性，特异性，无放射污染等特点 ......
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