参苓白术丸微生物限度检查方法的验证
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根据上述预试验结果,采用常规法及培养基稀释法(供试液：0.5mL/皿)试验时，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均小于70%，表明参苓白术丸对细菌抑制作用明显；采用培养基稀释法(供试液： 0.2mL/皿)试验时，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均大于70%，表明该法有效消除了参苓白术丸对细菌抑制作用。初步确定参苓白术丸细菌计数方法为培养基稀释法(供试液： 0.2mL/皿)。采用常规法试验时，白色念珠菌回收率为98.3%，说明参苓白术丸对霉菌和酵母菌没有抑制作用。初步确定参苓白术丸霉菌和酵母菌计数方法为常规法。
2.1.5细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法的验证[1]
取3个批号的参苓白术丸样品，细菌按培养基稀释法(供试液： 0.2mL/皿)进行细菌加菌回收率试验，而霉菌和酵母菌则按常规法进行加菌回收率试验。结果见表2。
表2 培养基稀释法(0.2mL/皿)5种阳性菌回收率试验结果
上述试验说明,采用培养基稀释法(供试液：0.2mL/皿)试验时，三个批号的药品中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均大于70%，表明该法可用于药品细菌数检查；白色念珠菌、黑曲霉菌按常规法回收率均大于70%，表明该法可用于该药品霉菌和酵母菌数检查。
2.2控制菌检查方法验证[1]
2.2.1大肠埃希菌检查方法验证
①试验组：取2.1.2项下的1:10供试液10mL接种至100mL胆盐乳糖培养基(BL)中，同时加入大肠埃希菌10~100cfu，35℃培养24h。取培养物0.2mL接种至5mL MUG培养基试管中，35℃培养5h，24h，在365nm紫外灯光下观察荧光，然后再进行靛基质试验。另取培养物在麦康凯琼脂培养基平板上划线，35℃培养24h，观察其菌落形态。②阴性菌对照组：取1:10供试液10mL接种至100mL胆盐乳糖培养基(BL)中，同时加入金黄色葡萄球菌10~100cfu，作为阴性菌对照试验菌，方法同试验组。结果见表3。
表3大肠埃希菌试验结果
2.2.2大肠菌群检查方法验证
①试验组：取2.1.2项下1:10供试液1mL接种至10mL胆盐乳糖发酵管培养基中，同时加入大肠埃希菌10~100cfu，35℃培养18~24h。另取培养物在麦康凯琼脂培养基平板上划线，35℃培养18~24h，观察其菌落形态。②阴性菌对照组：取1:10供试液1mL接种至10mL胆盐乳糖发酵管培养基中，同时加入金黄色葡萄球菌10~100cfu，作为阴性菌对照试验菌，方法同试验组。结果见表4。
表4 大肠菌群试验结果
3讨论
3.1参苓白术丸处方中的茯苓、白扁豆、甘草这3味中药具有较强的抑菌性。茯苓的100%煎剂用平板打洞法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌等均有抑制作用[3]。白扁豆有抗菌、抗病毒作用 ，100%白扁豆煎剂用平板纸片法，对痢疾杆菌有抑制作用[3]。甘草有抗微生物作用，甘草浸出液体外抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、阿米巴原虫及滴虫等均有效[4]。
3.2具有抑菌性药物的微生物限度检查结果的准确性，主要取决于样品本身在试验条件下是否抑制被检微生物的生长繁殖。检验时应排除其抑制作用，使之不干扰染菌限度检验，结果方能专属有效。本试验通过预试验，采用排除法确认可行的方法。3批样品的验证试验结果表明：①采用培养基稀释法对参苓白术丸进行细菌数的测定，3种规定试验菌的回收率均大于70%以上，符合验证的要求；②采用常规法测定霉菌及酵母菌数 ......
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