高效液相色谱法测定五柴颗粒中五味子甲素的含量

http://www.100md.com 2011年3月1日 丁桂林 甄中锋 郭庆英

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     【摘要】 目的：研究五柴颗粒中五味子甲素含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱C18(4.6mmx250mm，5um)；流动相为甲醇；流速 1.0ml.min - 1 ; 柱温40℃: 检测波长 250 nm。结果：五味子甲素线性范围是0.043-0.431，r =0.9999，平均回收率99.5% ，RSD =0.67%(n =6)。 结论：该法可用于测定五柴颗粒中五味子甲素的含量。

    【关键词】 高效液相色谱法；五柴颗粒；五味子甲素

    五柴颗粒的主要成分：五味子，柴胡，半枝莲，丹参。功能主治：清热解毒，疏肝化瘀，保肝降低谷丙转氨酶，适用于肝郁脾虚慢性乙型肝炎和早期肝硬化患者。处方选用《中国药典》2010年版(一部)规定使用的木兰科植物五味子 Schisandra chinensis ( Turcz. ) Baill的干燥成熟果实入药[1], 其有效成分为五味子甲素，本文用高效液相色谱法，建立了五味子甲素的含量测定方法。

    1仪器与试药

    岛津 LClOAT.VP 高效液相色谱仪和 SPD一10AV 紫外检测器( 日本岛津 ) 。甲醇为色谱纯 , 其他试剂均为分析纯。五味子甲素对照品 ( 中国药品生物制 品检定所，批号: 0764-200107，供含量测定用)。五柴颗粒(济宁市传染病医院药学部提供,规格:12g包;批号: 080830,081242,090101,)

    2方法与结果

    2.1色谱条件与系统适用性试验

    色谱柱:Kromasil C18 柱(250mmx4.6 mm,5μm)；流动相：甲醇, 流速：1.0 ml.min - 1 ; 柱温:40℃；检测波长250nm。

    2.2溶液的制备

    对照品溶液取经五氧化二磷减压干燥24h后的五味子甲素对照品约3mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀, 即得(每 1 ml溶液中含五味子甲素对照品0.431mg)，作为对照品溶液。

    供试品溶液五柴颗粒内容物研细，取细粉5.0 g, 精密称定，置250 ml具塞三角烧瓶中，加乙酸乙酯超声提取4次，每次加40ml正己烷，超声0.5h，滤过，合并乙酸乙酯提取液 , 低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，定量转入 25 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过 , 弃去初滤液，取续滤液，即得。

    阴性对照品溶液按处方的比例与制法制成缺五味子的阴性样品 ,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

    2.3样品测定方法

    分别精密吸取对照品溶液、供试品 溶液和阴性对照品溶液各 20μl, 注入高效液相色谱仪 ,依上述色谱条件，以外标法进行测定。

    2.4检测波长确定

    精密吸取五味子甲素对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪，经二极管阵列检测器对五味子甲素吸收峰于190nm~400nm处进行吸收光谱测定，结果供试品与对照品的紫外吸收光谱基本一致，均在250 nm处有强吸收，故本品测定波长定为250 nm。

    2.5系统适用性试验

    精密吸取五味子甲素对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10ul，按上述色谱条件测定，阴性对照品溶液在五味子甲素相对应的位置无干扰。色谱图见图1。

    A

    B

    C

    A.五味子甲素对照品 B. 供试品 C. 阴性对照品

    图 1五味子高效液相色谱图

    2.6线性关系考察

    分别精密吸取五味子甲素对照品溶液 ( 浓度为 0.431mg.ml-1)倍量稀释，进样20 ul,按上述色谱条件进行测定,记录峰面积，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明五味子甲素回归方程为Y =2.2533e-008X, r = 0.999994 进样量在 0.043 -0.431ug间与峰面积线性关系良好。(见表1)。

    表1线性关系考察结果

    2.7稳定性试验

    精密量取供试品溶液10ul , 每隔2h 进样测定 一次 , 考查 12 h, 测定五味子甲素峰面积均值为 1465315,RSD 为 0.75%。试验表明样品稳定性较好。(见表2)。

    表2稳定性试验结果

    2.8重复性试验

    取同一批号样品(080827 )6份，分别制成供试品溶液，按样品测定方法测定，结果五味子甲素含量平均值 0.318mg.g-1，RSD为0.048%。(见表3)。

    表3重复性试验结果

    2.9精密度试验

    精密吸取五味子甲素对照品溶液20ul , 重复进样测定 6 次 , 五味子甲素峰面积均值为 11923327, RSD 为 7.65%(见表4)。

    表4精密度试验结果

    2.10加样回收试验

    取经五氧化二磷减压干燥24h后的五味子甲素对照品5.04mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,作为标准加样储备液(每 1 ml溶液中含五昧子甲素对照品201.6ug)。精密称取已知含量的五柴颗粒内容物细粉2.50g6 份 ( 批 号 :080727, 五味子甲素含量: 0 ......

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