髓过氧化物酶-463G/A基因多态性与福建汉族人冠心病易感性的关系
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【摘要】目的研究髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)-463位G/A基因多态性与福建汉族人冠心病易感性的关系。方法采用病例-对照研究方法，应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术检测157例冠脉造影证实的冠心病患者(冠心病组)和78例冠脉造影未对照者(冠脉造影未发现任何可辨认斑块或狭窄，对照组)MPO-463位基因型，并进行统计学分析。结果MPO-463位G/A多态性有3种基因型(GG，GA，AA)，两组间基因型分布和等位基因频率分布差异有统计学意义(P均<0.05)，携带至少一个等位基因G(GG+GA型)者发生冠心病的危险性是不携带此基因(AA型)者的3.518倍。结论 MPO-463位基因多态性与福建汉族人冠心病易感性相关。
【关键词】髓过氧化物酶；冠状动脉性心脏病；基因多态性
冠心病是(CHD)由于冠状动脉粥样硬化使冠脉管腔狭窄或阻塞，或(和)冠状动脉功能性改变(痉挛)导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病，与遗传、环境等多种因素有关。目前认为，髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)通过多种机制参与动脉粥样硬化的发生发展，因此本文从基因角度对我国福建汉族人MPO-463bp处G/A基因多态性进行了分析，探讨其与CHD易感性的关系。
1 资料与方法
1.1 临床资料
收集2005年11月至2006年10月在福建省立医院住院并经冠脉造影证实至少有1支冠状动脉狭窄≥50%者157例为CHD组，男125例，女32例，年龄33~87岁，平均年龄62.93±11.09岁。均为福建汉族人。对照组为福建汉族同期住院后经冠脉造影证实未发现任何可辨认斑块或狭窄者78例，男49 例，女29例，年龄20~86岁，平均年龄59.64±11.32岁，排除X综合征、周围血管病、变异型心绞痛以及有明显心肌梗死证据的个体。
1.2方法
1.2.1模板DNA制备
采集EDTA-K2抗凝静脉血2ml，采用盐析法提取外周血DNA，并用核酸蛋白分析仪对其进行定量测定。
1.2.2引物设计与合成
设计一对引物[1]，P1 ：5’-CGG TAT AGG CAC ACA ATG GTG A-3’， P2：5’-GCA ATG GTT CAA GCG ATT CTT C-3’，由TaKaRa公司合成。
1.2.3PCR反应条件反应体系包括引物0.4μM、dNTP 0.2mM、Buffer2.5μl、Taq酶0.625U、模板DNA 100ng，用无核水补足体积至25μl。PCR反应循环参数：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸45s，循环35个周期；最后72℃额外延伸10min。4℃备用。
1.2.4 扩增产物的限制性酶切用限制性内切酶Aci I消化经琼脂糖凝胶电泳鉴定的PCR产物，37℃水浴16小时以上，65℃保温20min 终止反应。酶切产物采用3%琼脂糖凝胶电泳，电泳结果用凝胶成像系统进行成像和分析(瑞典Amersham Pharmacia公司)。
1.3统计学处理基因型频率用基因计数法统计。基因型的Hardy-Weinberg 平衡符合程度用χ2检验。冠心病组与对照组间的基因型及等位基因频率分布的比较采用χ2检验；计算比值比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(confidence interval, CI)。以P<0.05为差异有显著性意义，应用SPSS 11.5 统计软件进行数据统计分析。
2 结果
2.1MPO基因-463G/A基因位点检测PCR扩增产物为350bp，其中含有一个固定的Aci I酶切位点，酶切后产生一个61bp的片断作为内对照。当为G等位基因时，酶切后形成三个片断，169bp、120bp和61bp；当为A等位基因时，形成两个片断，289bp和61bp(见图1)。
(M: Maker1、3：GA基因型2：GG基因型4：AA基因型)
图1酶切产物经3%琼脂糖凝胶电泳结果
2.2 MPO-463G/A多态性的基因型分布的组间比较
基因型分布符合Hardy-Wenberg 平衡，MPO-463G/A多态性在冠心病组与基因型分布和等位基因频率分布差异有统计学意义(χ2值分别为8.474和8.201，P均<0.05)，见表1。
表1 冠心病组与对照组MPO –463G/A 基因型和等位
注：与对照组比较，*P均<0.05
2.3冠心病组和对照组MPO-463位基因型构成比比较具有GG基因型者发生冠心病的危险性较具有AA基因型者显著增高(χ2＝7.315, P=0.007<0.01，OR=4.070，95%CI=1.472-11.253)；杂合子GA发生冠心病的危险性较纯合子AA仍有升高趋势(χ2＝3.53, P=0.060，OR=2.750， 95%CI=0.957-7.900)；将GA和GG基因型合并计算，发现携带至少一个等位基因G者其患冠心病的风险仍显著增高(χ2＝6.20, P=0.013<0.05，OR=3.518，95%CI= 1.307-9.472)，见表2。
表2 MPO基因型与冠心病遗传易感性的关系
3讨论
冠心病是一种多因素疾病，即多种因素作用于不同环节所致。随着分子生物学技术的不断发展及SNP技术在临床的应用，目前认为冠心病的发生发展可能与基因的多态性相关[2] 因此，对冠心病相关基因多态性的研究，不仅可预测疾病发生的风险度，且可为疾病的基因诊断和治疗提供理论基础。
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