金荞麦中表儿茶素提取工艺的研究
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【摘要】 以表儿茶素为考察指标，以正交实验设计法为依据，重点考察提取溶剂乙醇的浓度、提取次数和提取时间3个因素，每个因素3个水平，按L9(34)正交表设计实验，采用高效液相法测定其含量。实验证明，最佳提取工艺条件为45%的乙醇回流提取3次，每次1h。本优选工艺稳定可行，提取率高，重现性好。
【关键词】 金荞麦；表儿茶素；提取工艺；正交实验法
Study on Extraction of the Epicatechin in theFagopyrum cymosum Meisn
Author: Zhang-can
JINHUA COLLEGE OF PROFESSION AND TECHNOLOGY
【Abstract】 Take table caffeine as a inspection target, Adopt the method of orthogonal test design and mainly pay attention to three factors: the quatity of extraction ethyl alcohol, the number of extraction times and extraction time, three levels every factor. Design the experiment according to L9(34). Then measure the extract content by HPLC. The experiment shows the best extraction process that backflow for three times with 45% ethly alcohol, one hour every time. This optimal craft is stable , viable and reproducible.
【Key words】 Fagopyrum cymosum Meisn ; epicatechin; extraction process; orthogonal test
1 引言
中药金荞麦系蓼科植物金荞麦的干燥根茎，其味微辛、涩、凉，归肺经[1]，具有清热解毒，排脓去瘀之功效，临床主要用于治疗肺脓疡、麻疹肺炎、扁桃体周围脓肿等症[2]。现代药理研究表明，金荞麦具有广泛的药理活性。近年来通过对金荞麦有效部位的研究，发现金荞麦提取物具有抗菌、抗感染、解热抗炎、抗癌细胞侵袭和转移的作用[3]，能增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体的免疫机能等功效[4-5]。药理实验证明，金荞麦提取物还具有降血脂和血糖、镇咳祛疾、抗突变和对肝损伤的抑制作用[6-7]。
本课题采用现代中药提取手段，以正交试验设计法为依据，重点考察提取溶剂乙醇的浓度、提取次数和提取时间的影响，为金荞麦中表儿茶素选择最佳提取工艺条件。
2 实验部分
2.1 仪器、试剂与材料
2.1.1 仪器
日本岛津SPD-10AVP高效液相色谱仪，C-R3A数据处理机，SB2200型超声波提取器(上海超声仪器厂出品)。R-202旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司)，KQ-250B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)
2.1.2 试剂 金荞麦为温州药材公司提供；表儿茶素对照品由中国生物制品检定所提供。
乙醇，甲苯、乙酸乙酯、甲酸(天津市化学试剂二厂)，磷钼酸(广东台山化工厂)，以上试剂均为分析纯,甲醇为色谱,水为百事冰纯水。
2.2 正交实验法
2.2.1 因素水平的确定 以表儿茶素为指标，重点考察提取时间、溶媒乙醇的浓度、倍数三个因素，每个因素选择三个水平，按L9(34)正交表设计实验。
表1 因素水平表
2.2.2 金荞麦的提取工艺 取中药材金荞麦根茎50g，置于1000mL的大圆底烧瓶中，分别加入正交表中相应浓度相应倍数的乙醇回流提取，按正交表中相应的时间进行提取。旋转蒸发回收溶剂到少量，移至蒸发皿中继续挥发浓缩至膏状，(膏比重≈1.2-1.3)，再将样品放到烘箱烘12小时，干燥即得。
2.3 高效液相
2.3.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil(钻石) C18柱(4.6mm × 250mm , 5um)；流动相：磷酸水溶液(用酸度计调pH = 3.0 )：乙腈 = 82.5∶17.5流速：0.7mL/min； 检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：20uL；
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取表儿茶素对照品10.07mg，加甲醇制成含表儿茶素0.1007mg/mL的溶液。
2.3.3 供试品溶液的制备 取正交实验提取的金荞麦浸膏各0.2g，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇-水(1∶1)少量，超声20min溶解后，放冷，再加甲醇-水(1∶1)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液经微孔滤膜(Φ =0.45un)滤过，备用。
2.3.4 标准曲线的绘制 精密称取表儿茶素对照品10.07mg，加入甲醇使溶解并定容于10mL容量瓶中，摇匀即得。用0.45un微孔滤膜滤过后，进样量依次为10ul. 20ul. 30ul. 40ul. 50ul分别进样，每一次浓度重复3次，测定峰面积积分值。以对照品浓度(C)对峰面积(A)绘制标准曲线，结果表明，表儿茶素在1007ug-5035ug之间与峰面积呈线性相关。线性方程为：y = 2×107x-21119 R2 = 0.9999
3 实验结果
3.1 正交实验结果 测定金荞麦中表儿茶素含量，按照中华人民共和国2005版药典品种项下的规定，精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测定对照品和供试品待测成分的峰面积(或峰高)，按下式计算含量 ：
式中； m1为所取膏重，m2 为总膏重，M为生药量，A1为样品峰面积，A2为标准品峰面积，V为样品体积，C2为标准品浓度。
提取率的直观分析结果：C→B→A→D 直观分析最佳工艺为C1B3A2
提取的方差分析：SSj = (Ⅰj2 + Ⅱj2 + Ⅲj2 ) / 3 -〔∑yi〕2/9
乙醇浓度对提取工艺有显著性影响 ......
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