去甲斑蝥素诱导人鼻咽癌细胞CNE1凋亡的实验研究﹡
培养液,1材料与方法,2方法,3统计学处理,2结果,1CNE1细胞的生长增殖情况,2MTT检测CNE1细胞增殖,3细胞凋亡的检测,4细胞周期分析,3讨论
孙 健 王 炎 王国娟 李 琦上海中医药大学附属普陀医院 (上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所),上海200062
中国是鼻咽癌(nasopharynegeal carcinoma,NPC)高发区,发病率占全世界80%以上[1]。目前,鼻咽癌的治疗以放射治疗为主,但5年生存率仅50%左右,因此,寻找有效的治疗手段和药物是鼻咽癌研究的热点[2]。去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是由我国首先合成的一种抗肿瘤药物,是一种中药单体,目前已应用在多种肿瘤的实验和临床治疗研究[3]。目前,有关NCTD治疗鼻咽癌的研究尚未见报道。笔者研究了NCTD对鼻咽癌细胞CNE1增殖和凋亡的影响,为NCTD临床治疗鼻咽癌提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
去甲斑蝥素(山东平原制药厂,H37023401)。RPMI 1640培养液(GIBCO公司);人鼻咽癌细胞株(CNE1)(中科院上海细胞库),37℃恒温,5% CO2密闭传代培养;PI染料(Sigma公司);凋亡检测试剂盒(BD公司)。
1.2 方法
NCTD溶解于1640培养液,过滤后除菌,配制成100 mmol/L NCTD母液。用10%小牛血清的1640培养液将NCTD母液稀释成 10、20、40、60、80、100μmol/L 的工作液。
1.2.1 MTT比色法检测CNE1细胞的增殖 胰蛋白酶消化CNE1细胞并计数后,按每孔1×104个细胞接种于96孔细胞培养板内。24 h后,随机分为 7组,分别加入含0、10、20、40、60、80、100μmol/L的 NCTD 培养液 ......
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