EPO治疗干预对RPE细胞氧化损伤的保护作用(2)
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参见附件。
1.2 实验方法
1.2.1 人RPE细胞的体外培养 详见文献[5]。
1.2.2 实验分组及建立RPE细胞氧化损伤模型 人RPE传代细胞随机分为5组，每组4孔：①正常对照组；②过氧化氢氧化损伤模型组(600 µmol/L过氧化氢损伤，不加EPO药物干预)；③过氧化氢+10 IU/mL EPO组(600 µmol/L过氧化氢损伤，10 IU/mL EPO药物干预)；④过氧化氢+20 IU/mL EPO组(600 µmol/L过氧化氢损伤，20 IU/mL EPO药物干预)；⑤过氧化氢+40 IU/mL EPO组(600 µmol/L过氧化氢损伤，40 IU/mL EPO药物干预)。
1.2.3 MTT检测 细胞接种于96孔板，接种密度2×104个/mL，每孔200 µL，每组4孔。培养24 h使细胞融合约80%～90%；将原培养液吸出，按上述分组换入含有不同成份的DMEM/F12培养液，继续培养24 h；更换为正常培养液培养24 h。弃去培养液，每孔加入MTT终浓度为0.05 mg/mL的无血清培养液，培养3 h，弃去培养液，每孔加入二甲基亚砜(DMSO)100 µL，置摇床振荡10 min，用不含细胞的DMEM/F12培养液调零，应用DG3022型酶联免疫检测仪在490 nm波长处读取各孔吸光度(A490)值。
1.2.4 免疫组织化学法检测Caspases-9蛋白表达 将RPE细胞按密度2×105个/mL接种于6孔板中 ......
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