荧光原位杂交技术在多发性骨髓瘤中的应用(2)
 |
| 第6页 |
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.4 原位杂交
在暗室按照检测试剂盒操作说明配制探针，73℃70%甲酰胺变性6 min，置45~50℃环境中备用。老化好的玻片置73℃70%甲酰胺中变性6 min，依次置于-20℃的70%乙醇、85%乙醇和100%乙醇中梯度脱水各3 min，晾干，置45~50℃烤片机上预热2~5 min，将10μL变性后的探针滴加于杂交区域，加盖盖玻片(避免产生气泡)，42℃密封过夜。杂交后的玻片依次置于46℃50%(v/v)甲酰胺/2x SSC溶液和2x SSC溶液中洗涤，室温70%乙醇浸泡3 min。晾干后，DAPI复染15 min，封片。
1.5 结果观察
荧光显微镜下观察，通过Imstar FISH软件控制的CCD(ProgRes MFcool)摄取图像，每例分析100~200个间期细胞核。IGH探针正常显示2个红色和绿色融合的黄色荧光杂交信号，出现分离的红色或绿色荧光杂交信号为IGH重排；RBl、D13S319、p53和lq21探针正常均显示2个红色或绿色杂交信号，无或仅有1个杂交信号为该探针缺失，具有3个及以上杂交信号的则为该探针扩增。
1.6 结果判断
以15例非血液系统恶性疾病患者为对照组，计算各探针阳性细胞表达率的均值(x)和标准差(SD)，并以x+3SD为阳性阈值。对于MM患者，其FISH检测的阳性细胞表达率大于阈值判定为阳性结果，小于阈值判定为阴性结果。
1.7 统计学处理
应用SPSS17.0统计软件对样本率进行x2检验和Spearman 相关系数分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各探针阳性阈值的建立
对15例非血液系统恶性疾病患者的骨髓样本，每例分析100~200个间期核细胞，得到各探针阳性细胞表达率，计算均值(x)和标准差(SD)，以x+3SD为阳性阈值 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。