急性脑梗死血小板活化状态的检测及临床意义(2)
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[Key words] Cerebral infarction;P-selectin;Lysosomal membrane protein53;PAdT and PAgT
急性脑梗死(ACI)是一种严重危害中老年人健康的缺血性脑损害性疾病。本病病因病机十分复杂，有研究表明，血小板的高活化状态在脑梗死形成过程中具有重要作用，是发生ACI重要危险因素之一[1-2]。为此，本研究拟通过对52例ACI
患者发病不同时程的血小板黏附率(PAdT)、血小板聚集率(PAgT)和血小板P-选择素(CD62P)、溶酶体蛋白(CD63)表达率的检测，进一步研究脑梗死发病过程中血小板的活化状态，明确血小板各项活化功能检测指标的相互关系与临床应用价值，为深入研究ACI发病机制和建立实验室诊断敏感指标提供科学的依据。
1?资料与方法
1.1?研究对象
脑梗死组：为2011年4月～2011年12月间笔者所在医院神经内科住院的脑梗死患者52例，其中男28例，女24例；年龄51～82 岁，平均(63.3±12.3)岁；临床诊断符合全国第五届脑血管病学术会议修订的标准，神经功能缺损程度评分(NDS)：轻型16例，中型28例，重型8例。排除肝肾疾病、肿瘤、感染、自身免疫性疾病和代谢性疾病。发病前2周内未服过阿斯匹林、潘生丁等影响血小板功能的药物和其他抗凝药物。
正常对照组：系30名来自笔者所在医院同期健康体检者，排除冠心病、高血压、糖尿病史等，与脑梗死组在性别、年龄上比较差异无统计学意义(P>0.05)。
1.2?主要试剂与仪器
1.2.1?主要试剂?单克隆抗体CD62p-FITC、CD63-PE、IgG1-FITC、IgG1- PE，均购自法国Immunotech公司。
1.2.2?主要仪器?流式细胞仪(EPICS-XL型，美国Coulter公司)、血小板粘附仪(中国医学科学院血研究所产品)、血小板聚集仪(PEA3200型，日本科学株式会社产品)。
1.3?方法
1.3.1?采血时间与标本制备?全部患者于发病的急性期(1～3 d)及稳定期(治疗的10～14 d)分别清晨空腹抽取静脉血，用106 mmol/L枸缘酸钠抗凝(血与抗凝剂比9∶1)，以800 r/min离心5 min，取富含血小板血浆(PRP)，用于CD62p与CD63测定。
1.3.2?CD62p与CD63测定?取200μL PRP以等体积2%甲醛固定，再用磷酸缓冲液(PBS)洗涤2～3次，调整血小板浓度为300×109/L，分别加入CD62p、CD63荧光单抗避光室温混匀孵育30 min，然后用PBS洗涤1次后，加入0.5 mL PBS重悬，采用流式细胞仪进行检测。测定中用CD41/sslog散点图设门，流速控制在100～200 s，每份标本测定5 000～10 000个血小板[3]。
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