寡核苷酸类药物磷的定性定量分析(2)
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参见附件。
3.5 回收率测定
取干燥至恒重的样品(CT102,批号20120626)43.5 mg,用水溶解,置50 mL容量瓶中,加水至刻度。分别取5 mL,7份,分别置于圆底烧瓶中,其中6份分别加入磷酸二氢钾标准溶液(C=0.186 mg/mL)2.0,2.0,2.5,2.5,3.0和3.0 mL,剩余一份不加标液。然后各加水至20 mL,玻璃珠数粒,浓硝酸2 mL,用调温电热套加热浓缩至10 mL,冷却。再加浓硝酸5 mL,用调温电热套加热浓缩至10 mL,冷却。再加5 mL高氯酸,用调温电热套加热,待冒白烟后,于瓶口处放一漏斗,使其回流并回流浓缩直至溶液为3 mL,放置,待冷却,定量转移至100 mL容量瓶中,用水冲洗净烧瓶数次,加水至刻度,即得回收率测定样品溶液。从样品溶液中各取10 mL置于25 mL容量瓶中,加2.5 mL钼酸铵溶液,震荡并放置30 s,再加2.5 mL对苯二酚溶液,最后加2.5 mL 20%的亚硫酸钠溶液,空白为不加对照品母液其余相同的溶液,放置30 min。用紫外可见分光光度计于730 nm处测其吸收值,依标准曲线计算磷的量,测定回收率。回收率结果如表2。
3.6 核磁共振31P-NMR谱P S键
用核磁共振31P-NMR谱,确定本品寡核苷酸类化合物磷酸骨架上化学位移为55 ppm的PS键。
图1 PS键核磁共振31P-NMR谱图
4 结论
用硝酸-高氯酸消解,钼酸铵比色紫外分光光度法测
定寡核苷酸类抗肝癌药物和抗病毒药物中磷的含量,简单易行,操作性强,结果稳定性好,回收率较高,可为其他核酸类药物测定提供借鉴。
本文钼酸铵比色紫外分光光度法[4]测定该药品中磷含量测定磷含量,两批CT102中磷含量为8.345%(20120626)和8.22%(20120817-2);两批FLU中磷含量为8.89%(20100706)和8.982%(20100512-1)。
用核磁共振31P-NMR谱,确定了本品寡核苷酸类化合物磷酸骨架上化学位移为55 ppm的PS键。见图1。
[参考文献]
[1] 刘德富.卵磷脂中磷的分光光度法测定[J].松辽学刊(自然科学版),1998,10 (4):41.
[2] 马金玲,张红军.分光光度法测定大豆磷脂中磷的含量[J].黑龙江医药科学,2000,23(1):21.
[3] 陈世彬,史亚军,施俊辉,等.黄芩提取物亚微乳中磷含量的测定[J].成都中医药大学学报,2012,35(3):70.
[4] 中华人民共和国国家标准.GB 11893-89水质总磷的测定钼酸铵分光光度法[S].1989.
(收稿日期:2013-03-25)
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