RNAi体外沉默淋巴管内皮祖细胞VEGFR—3基因表达(2)

http://www.100md.com 2014年9月15日 陈永春?金海峰?谢立平?王丽芳?张梅?李珅?高喜仁?李静平

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    参见附件。

     1.4.4 Western blot 转染步骤同上，转染后培养72h，弃培养基，用0.01M PBS浸洗2次。加入RIPA蛋白提取试剂，冰上裂解25min；用刮勺将细胞刮取至1.5mL EP管中(冰上操作)，12 000rpm，4℃离心12min，上清液转移至EP管中，BCA法测蛋白含量。各组上样量相同，SDS-PAGE电泳分离蛋白，将凝胶上的蛋白用湿式电转移到PVDF膜上，用含3%BSA封闭液封闭，然后1mL兔抗人VEGFR-3抗体稀释液(1∶200)处理，以同样的方式加入HRP标记的羊抗兔IgG孵育2h。用ECL法显影。

    1.5 统计学分析

    数据均经SPSS13.0软件进行处理，用()表示；多组间的比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 体外转染结果

    N/P=8时，流式细胞仪检测siRNA/PEI转染组转染效率为30%。

    2.2 各组VEGFR-3 siRNA抑制VEGFR-3表达的分析

    2.2.1 半定量RT-PCR结果分析 各组VEGFR-3mRNA表达结果显示，空白与阴性转染组之间无差异，siRNA a组、siRNA b组、siRNA c组与空白转染组和阴性转染组比较均有显著差异，其中siRNA a组抑制效率最高(图1) ......

    http://www.100md.com/html/paper/2095-0616/2014/18/02-1.htm

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