毕 峰杨明妍杨硕妍

    1.吉林省神经精神病医院，吉林四平 136000；2.长春理工大学，吉林长春 130022

    RNA干扰对Survivin基因抑制效应的测定

    毕 峰1杨明妍1杨硕妍2

    1.吉林省神经精神病医院，吉林四平 136000；2.长春理工大学，吉林长春 130022

    目的利用RNAi技术沉默Survivin基因对其抑制效应进行测定。方法应用RNAi技术，以SurvivinsiRNA重组质粒为载体，通过RT-PCR和Western-blot法检测Survivin基因的表达。结果Survivin 基因的表达明显低于对照组，达到抑制效果；采用Western blot检测Survivin在基因表达水平上的抑制作用，同样达到了抑制效果。结论利用RNA干扰技术沉默Survivin基因抑制细胞生长，促进凋亡。表明Survivin基因参与了信号转导，有望成为基因治疗的新靶点。

    Survivin基因；抑制效应；RNA干扰技术

    Survivin基因是一种凋亡抑制蛋白，表达于大多数肿瘤组织及胚胎阶段组织，如乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、血液系统肿瘤等。Survivin影响着肿瘤细胞的增殖及凋亡，与疾病的进展密切相关，Survivin基因的以上特点可能为今后的基因治疗提供新靶点[1]。

    RNAi可通过转录后监控程序达到抑制基因的目的，可使mRNA降解。RNAi具有高效性、特异性等特点，适用于基因的分析，从而为临床基因治疗开辟新途径[2]。

    本研究选择在正常成熟组织中不表达而在肿瘤组织中高表达的Survivin基因作为研究对象，利用RNAi技术沉默Survivin基因[3-9]。

    1 材料与仪器

    1.1 实验材料

    (1)DNA Ligation Kit、RT-PCR Kit、核酸内切酶 HindⅢ、核酸内切酶 BamHⅠ、蛋白质Marker、RNA Marker、DNA Marker DL8000均购自大连宝生物工程公司；(2)抗人Survivin单克隆抗体购自Zymed；(3)兔抗人β-actin多克隆抗体购自Cell Signaling；(4)ECL试剂盒购自Pharmacia；(5)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗、羊抗兔二抗购自KPL；(6)氯仿、异戊醇、胰蛋白胨、琼脂、酵母浸出粉、RPMI-1640购自北京化学试剂公司；(7)丙烯酰胺、尿素、过硫酸胺、甲叉双丙烯酰胺、四甲基乙酰胺、琼脂糖、二甲苯兰FF、溴酚蓝、X-gal、PTG、二甲基甲酰胺购自北京鼎国生物技术公司 ......