长春地区598例乙型肝炎病毒基因分型及耐药变异分析(2)
1.2 HBV感染血清学标志物和HBVDNA测定患者血清HBV感染标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 、HBcAb采用罗氏试剂在罗氏7100电化学发光仪测定(Roche Diagnose,中国上海);HBVDNA采用中山达安基因有限公司试剂在美国ABI荧光定量PCR扩增仪测定。
1.3 HBV基因分型和耐药检测
采用深圳亚能生物技术有限公司生产HBV分型和耐药突变基因检测试剂盒,可检测HBV B\C\D基因型以及常见核苷(酸)类似物耐药相关的8个耐药位点,包括:rt180、rt184、rt204、rt202、rt207、rt181、rt236、rt250。
1.4 HBV基因型和耐药性检测方法
严格按试剂盒说明书进行操作,主要操作流程如下:(1)离心柱提取方法提取血清HBVDNA;(2)DNA为模板进行HBVDNA 的PCR扩增;(3)恒温杂交箱47℃杂交1.5h;(4)洗膜;(5)孵育;(6)显色:将膜条浸泡与显色液中避光显色15min ......
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