陈伟娜王燕清陈嘉璐

    1.遵义医学院第五附属 (珠海)医院，广东珠海 519100；2.丽珠医药集团股份有限公司研究院，广东珠海 519090

    替加环素微生物限度方法学验证研究

    陈伟娜1王燕清2▲陈嘉璐2

    1.遵义医学院第五附属 (珠海)医院，广东珠海 519100；2.丽珠医药集团股份有限公司研究院，广东珠海 519090

    目的建立替加环素的微生物限度验证方法。方法取本品5g，加入100mL营养肉汤，均匀分散，500r/min离心3min，取上清，为1∶20供试液。分别取供试液1mL，按薄膜过滤法分别处理，用含0.3%吐温80的0.1%灭菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜，冲洗量600mL，以消除替加环素样品的抑菌活性，进行替加环素的细菌及真菌的微生物限度验证。结果采用上述方法进行验证，5种菌的回收率均达到70%以上。结论采用薄膜过滤法，用600mL含0.3%吐温80的0.1%灭菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜的方法可用于替加环素微生物限度的检查。

    替加环素；微生物限度；方法学验证；吐温80

    替加环素由惠氏(Wyeth)公司研发，美国FDA于2005年6月和2006年7月批准惠氏的替加环素(Tigecycline，商品名Tygacil注射用替加环素)为治疗复杂腹腔内感染和复杂皮肤感染的一线药物[1]，其化学结构式见图1。该品种是甘氨酰四环素类抗生素中获得批准的第一个产品。替加环素对G+菌、G-菌、厌氧菌有广谱抗菌活性[2-4]，包括多重耐药性的G+菌，如MRSA、MRSE、抗青霉素的肺炎链球菌、VRE[5-6]。对不同耐药机制的耐四环素致病菌同样有效[7-9]，但对铜绿假单胞菌无抗菌活性[10]。替加环素是新型甘胺酰环素类抗生素，主要与细菌核糖体30S亚基结合，阻碍氨基酸肽延长，从而抑制细菌蛋白质合成来发挥抗菌活性[11]。他克服或限制了很多抗菌药物产生的两种主要耐药机制:外排泵和核糖体保护[12]。避免了四环素类抗生素耐药机制对其产生作用。

    因为替加环素的抑制细菌能力很强，所以我们在微生物限度方法学验证中，采用了直接接种法及培养基稀释法及不加吐温的薄膜过滤法等常规方法，细菌的回收率均无法达到要求。为消除本品的抑菌活性，我们发现当冲洗液中加入一定量的吐温后，即可满足细菌回收率的要求，我们通过对吐温含量和冲洗量的考察，最终确定本品的微生物限度方法，即采用薄膜过滤法，取1ml的供试品溶液，用600mL pH7.0含0.3%吐温80的0.1%无菌蛋白胨溶液作为冲洗液。具体研究如下。 ......