切除后将样本切成小块，立即加入RNA保护剂，置于-80℃冰箱备用。

    1.2 细胞培养

    人肾癌细胞株ACHN和肾小管上皮细胞株HK-2均由中山大学肿瘤防治中心实验室惠赠。细胞株常规于10%胎牛血清(Gibco，BRL，Grand Island，NY)、1%的青链霉素双抗(吉诺生物医药技术有限公司，20160125)DMEM培养基(Gibco，BRL，Grand Island，NY)在37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

    1.3 组织和细胞株总RNA的提取

    取适量冰冻组织置于研钵，加入液氮迅速研磨成粉末状，加入适量Trizol(Takara，Japan)进行裂解；按照试剂盒步骤分别加入氯仿、异丙醇等试剂进行提取总RNA，所有枪头、EP管均采用灭酶处理。在紫外分光光度计测定其纯度和浓度，RNA取纯度在260/280比值在1.8～2.1，并进行浓度配平，置-80℃冰箱备用。取1μg总RNA按照Takara反转录反应试剂盒进行两步法反转录成cDNA，反应条件为37℃ 15min，85℃ 5sec，4℃。

    1.4 RT-PCR

    取2μl反转录好的cDNA，分别加入SYBR GreenⅡ(Takara，Japan)试剂、相应特异性前后引物 ...... 濡傛灉鎮ㄥ湪浣跨敤鎵嬫満绛夋祦瑙堟椂鏃犳硶鏌ョ湅鎴栦笅杞藉叏鏂囷紝鍙兘鏄鎼滅储寮曟搸澶辩湡鈥滆浆鐮佲€濓紝璇风偣鍑诲睆骞曟渶涓嬫柟鐨勨€滅數鑴戠増鈥濇垨鈥滃師缃戦〉鈥濊闂€�


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