两种FISH试剂盒检测羊水染色体的比较(2)
1.3.2 FISH检测 (1)FISH标本预处理，5mL羊水在1500rpm离心去上清，加5mL KCL低渗液，37℃水浴后固定3次后去上清至1mL滴片室温过夜老化。将老化玻片加入37℃胃蛋白酶溶液消化放入2×SSC溶液漂洗2次，取出玻片依次置于70%、85%、100%乙醇梯度脱水后室温自然干燥。按照商业试剂盒程序配备各自探针备用。
1.3.2.2 DNA变性、杂交及洗涤 (1)Vysis公司FISH试剂盒：参照试剂盒说明书进行，在步骤上作根据实验室条件进行改进：将探针滴于杂交区域，放入杂交仪73℃变性1min，37℃杂交16h。杂交后放入(73±1)℃的0.4×SSC/0.3% NP-40液洗涤2min转至室温2×SSC/0.1% NP-40液，再洗涤15～30s，放入70%乙醇3min取出暗處自然干燥。(2)金菩嘉公司FISH试剂盒甲酰胺变性程序：参照试剂盒说明书进行，在步骤上作根据实验室条件进行改进：将玻片放入(73±1)℃的70%的甲酰胺/2×SSC液变性5min，将玻片依次置于-20℃的70%、80%、100乙醇进行梯度脱水 ......
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1.3.2.2 DNA变性、杂交及洗涤 (1)Vysis公司FISH试剂盒：参照试剂盒说明书进行，在步骤上作根据实验室条件进行改进：将探针滴于杂交区域，放入杂交仪73℃变性1min，37℃杂交16h。杂交后放入(73±1)℃的0.4×SSC/0.3% NP-40液洗涤2min转至室温2×SSC/0.1% NP-40液，再洗涤15～30s，放入70%乙醇3min取出暗處自然干燥。(2)金菩嘉公司FISH试剂盒甲酰胺变性程序：参照试剂盒说明书进行，在步骤上作根据实验室条件进行改进：将玻片放入(73±1)℃的70%的甲酰胺/2×SSC液变性5min，将玻片依次置于-20℃的70%、80%、100乙醇进行梯度脱水 ......
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