颜 坚 彭细峰 蔡玉莲 邓江涛 张 涛

    深圳市龙岗中心医院，广东深圳 518116

    糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病的常见并发症之一，传统的治疗DR的方法有全视网膜光凝、玻璃体腔内曲安奈德注射、玻璃体切割术等[1]，虽然上述治疗方法在一定程度上能够改善和挽救患者的中心视力，但易产生玻璃体腔内积血、增殖膜形成、视网膜脱离等并发症[2]，为了抑制或降低上述并发症的发生，人们一直在不断寻求和研发新的治疗DR的方法。EphrinB2和Ephb4为在人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial，RPE)和增殖性玻璃体视网膜病变内膜(proliferative vitreoretinopathy，PVR)高表达的蛋白。有实验研究证实，视网膜内皮细胞EphrinB2呈高表达，一个细胞外域的EphB4受体的可溶性单体形式(sEphB4)可竞争性抑制受体激活，从而从总体上阻断内皮细胞功能和视网膜脉络膜新生血管的生成[3-5]。且sEphB4可抑制血小板衍生生长因子介导RPE细胞内的EphB4和EphrinB2磷酸化，从而抑制RPE细胞的迁移、粘附和增殖[6]。

    新生血管形成是一个复杂的病理过程，研究证实，血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)是促进新生血管形成的主要细胞因子，视网膜多种细胞均能合成与分泌VEGF，并受多种因素的影响。VEGF 是一种很强的内 皮细胞有丝分裂原，可增加血管的通透性，刺激血管内皮 细胞的增殖[7-8]。本研究拟采用DR兔眼模型进行研究，利用DR兔眼模型和经典类似于DR晚期增殖性视网膜病变的PVR兔眼模型，向玻璃体腔内多次注射不同剂量的sEphB4。注射6个月后对兔眼视网膜及玻璃体增殖膜的血管内皮细胞EphB4/EphrinB2和VEGF表达的影响进行观察分析。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器

    (1)试剂sEphB4(美国 VasGene Therapeutics公司)，MTT、Anti-EPHB4 (美国Sigma公司)，兔抗人EphB2抗体(美国Santa Cruz公司)，(美国Sigma公司)，DAB显色剂(武汉博士德)，Dylight488-SABC(武汉博士德)，表皮细胞生长因子(EGF，美国Peprotech公司)，全血基因组纯化试剂盒(美国Axygen公司)，SYBR Premix Ex Taq试剂盒、逆转录试剂盒、REAL-TIMEPCR试剂盒(日本Takara) ......