陈 彬 詹 学

    重庆医科大学附属儿童医院消化内科，重庆 400014

    早在十九世纪中晚期，德国科学家在观察人体胃组织切片的过程中就发现了螺旋菌，即后来的幽门螺杆菌(helicobacter pylori，HP)，因无法体外培养，它一直没有受到人们的重视，直到1982年才被两位澳大利亚科学家巴里·马歇尔(Barry J.Marshall)和罗宾·沃伦(J. Robin Warren)首次成功在体外分离培养。由于它与胃炎、胃溃疡和胃癌的密切关系[1]，人们越来越需要对HP的生物特性进行研究，从而指导临床诊疗工作，那么，如何改进已有的培养方式，使得HP的体外培养更加方便、快捷、高效就成为了一个亟需解决的问题，所以，从那以后人们一直在不断探索HP的最优体外培养条件。至今，各种体外培养方法已经得到了不同程度的优化。几个关键的培养条件为全血或血清、微氧及适宜的CO2气体环境，高湿度，温度37℃，pH值7.5以及4～10d的发酵周期[2]。

    1 固体培养基

    1.1 菌株的制备和保存

    目前培养用的幽门螺杆菌的来源主要有两个：一是在非选择性培养基上，通过病理活检组织培养获得HP。常用的非选择性培养基常为脑心浸液琼脂，其组成为：脑心浸润液，琼脂，5%脱纤维羊或牛血清。这种方式优点是成本低且易操作；缺点：一是得到的菌株可能不纯，且由于培养条件的限制，每次得到的菌株数量有限。同时，有报道称实验室用布鲁氏肉汤培养基对HP感染患者的血清培养获得了较好的HP菌株[3]。二是直接向生物公司购买，这种方式优点是方便、快捷，而且得到的菌株较纯，缺点是成本高，大量需要菌株时不宜采用。

    当用上述方式成功由活检组织中分离得到HP菌液后，我们需要将其进行保存，常用冷冻保存法，综合众多文献报道，保存效果及解冻后HP复苏率最高的为脑心浸液加甘油制成的冷冻保存液，保存温度为-70℃。而其它保存方法，如冻干保存法和布氏肉汤保存法，前者HP菌体复苏率极低，后者随着保存时间的延长，菌株数量不断减少。

    1.2 培养基类型

    当由人体胃组织样本获得的HP复苏后，可以通过多种方式进行体外繁殖培养。常用的培养基包括：布氏琼脂、哥伦比亚琼脂、脑心浸液琼脂和胰蛋白酶大豆琼脂。在前述培养基基础上添加羊或马血清(5%～10%)[2]。血制品也可以用高脂牛血清蛋白(AlbuMAX II)等代替[4]。另外，胰蛋白酶大豆琼脂可以不添加血清，作为HP的无血清培养基。需要说明的是，上述培养基中无论是加入血清还是全血 ......