张 园 彭伯坚 张拥军 骆凤娇

    广州市花都区人民医院消化内科，广东广州 510800

    Barrett食管(BE)是指食管远端鳞状上皮被化生的柱状上皮取代，是食管腺癌(EA)的癌前病变[1-2]。近年来菌群失调在消化系统疾病中的作用得到广泛重视，研究[3]发现与正常食管相比，BE食管末端的微生物类型中革兰氏阴性细菌(G-)占53.4%，而在正常食管黏膜中多为革兰氏阳性菌为代表的厚壁菌门，G-菌只占14.9%。由此我们推测除胃酸和胆汁刺激外，菌群变化导致G-细菌外膜LPS(脂多糖)增高是BE发生的重要致病因素之一。CDX2 是BE形成过程中的关键基因，但其上调机制尚不清楚[4]。本实验拟探讨LPS激活NF-κb对CDX2表达的影响，以期深入了解BE的发生机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    Het-1A细胞株购自上海序润生命科技有限公司。DMEM培养基购自Gibco公司，脂多糖购自sigam公司，实时荧光定量PCR所用的互补DNA第一链合成试剂盒购自天根生物科技有限公司，快速SYBR Green Master Mix试剂盒购自美国ABI公司，引物由公司设计合成上海英骏生物技术有限公司，一抗NF-κb、CDX2单克隆抗体均购自武汉博士德公司。

    1.2 方法

    1.2.1 组织 选取2016年3～8月花都区人民医院内镜中心行胃镜检测的患者52例，其中男29例，女23例，年龄35～65岁，平均(52.9±9.6)岁。分正常对照组和BE组，其中正常对照组32例，BE组20例(所有BE患者均符合中华医学会消化病学分会Barrett食管诊治共识修订的相关诊断标准)[6]。所有患者均有完整的病历资料，并且经病理科医生证实。拟采用免疫组化S-P法检测两组标本中NF-κB和CDX2的表达，并行χ2检验分析两组间参数表达的差异。

    1.2.2 免疫组化 取材后立即固定，石蜡包埋、切片、染色、封片，采用免疫组化S-P法检测正常食管鳞状上皮组和BE组样本各基因的表达。PBS做为阴性对照，用光镜观察结果。阳性标准：NF-κb以细胞质或细胞膜上呈现棕黄色颗粒为阳性；CDX2阳性颗粒定位于细胞核，核内出现棕褐色颗粒为免疫组化阳性 ......