IL-37对巨噬细胞吞噬杀伤结核杆菌能力的影响
分泌量,分支,1材料与方法,1细胞来源及分组,2主要材料,3细胞培养,4siRNA转染,5ELISA法检测培养上清中IL-37含量,6RT-PCR检测细胞因子mRNA水平,7Westernblot检测IL-37蛋
陈思达 卓宋明 李 娜 吴雨梅 黄 震▲ 季乐财1.深圳市龙岗中心医院呼吸内科,广东深圳 518116;2.深圳市龙岗区第三人民医院保安社区健康服务中心,广东深圳518115;3.深圳市慢性病防治中心,广东深圳 518020
结核病是由结核分枝杆菌感染引起常见慢性传染病,主要侵犯肺部,亦可通过血液、淋巴系统或创口直接接触等途径播散,可累及中枢神经、肠道、皮肤等[1]。巨噬细胞是机体抗结核免疫的重要效应细胞,其杀灭结核分支杆菌的途径主要有识别吞噬、自噬、分泌NO 等炎症因子等。同时巨噬细胞吞噬结核分支杆菌后,还可以作为抗原提呈细胞启动获得性免疫应答[2]。IL-37 是近年新发现的抑炎性细胞因子。现有研究发现,活动性肺结核患者血清IL-37 水平明显升高,并且可能诱导体内TH1/TH2细胞因子失衡,形成免疫抑制环境以允许结核分枝杆菌繁殖[3]。本研究通过siRNA 阻断巨噬细胞内源性IL-37 表达,及加入外源性IL-37 两种干预方式,评价IL-37 对巨噬细胞吞噬杀伤结核分枝杆菌能力的影响,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 细胞来源及分组
THP-1 人单核细胞系购自中国微生物菌种资源库。分为四组,每组16 例:(1)对照组:加入非识别siRNA 作为空染对照;(2)灭活结核分支杆菌(iH37Rv)组:siRNA 空 染+iH37Rv 刺 激;(3)iH37Rv+siRNA 干扰组:siIL-37 转染抑制IL-37 表达+iH37Rv 刺激;(4)iH37Rv+IL-37 组:加入外源性IL-37+iH37Rv 刺激。
1.2 主要材料
RPMI 1640 细胞基础培养基购自Hyclone 公司,胎牛血清购自Gibco 公司,INTERFERin体外siRNA 转染试剂盒购自Polyplus 公司,逆转录试剂盒、实时定量PCR 试剂盒购自toyobo 公司 ......
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