1.5RAGE mRNA表达检测

    用RT-PCR法，取100μL腹肌匀浆，用Trizol试剂提取总RNA，氯仿和异丙醇抽提。紫外分光光度仪和琼脂糖电泳鉴定RNA的浓度和纯度，取10μL，逆转录合成cDNA，-70℃冻存备用。取5μL逆转录产物进行PCR扩增反应，并以β-actin为内参对照。根据Gene Bank人类RAGE基因(Gene Bank登录号AB036432)设计RAGE基因引物，由杭州联川生物技术有限公司设计合成。RAGE基因序列为F：5'一GGGGTACCAAGGAAGCAGGTAGGCAGCC-3';R：5'-CCGCTCGAATCCATTCCTGTTCATCTGC-3'，扩增长度328bp。管家基因序列为F：5'-TCCTAGCACCATGAAGATC-3';R：5'一AAACGCAGCTCAGTAACAG-3'，扩增长度225bp。PCR反应条件：55℃逆转录反应60min，94℃变性2min→94℃30s→55℃30s→72℃1min，共30循环，72℃延伸7min。胶回收试剂盒回收目的基因片段。PCR产物在琼脂糖凝胶巾电泳，凝胶成像仪采集图像，PCR仪获得产物Ct值，采用2-△△Ct相对定量计算公式计算分析。

    1.6统计学分析

    应用SPSS20.0版本软件进行统计处理，计量资料以(χ±s)表示。两组资料比较采用独立样本t检验，多组资料比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义 ......