邢体坤 王 斌 郭冰峰 宋路萍 杨振苹 荆新蕊 郝一楠 张静静▲

    1.华兰生物工程股份有限公司研发中心，河南新乡 453003；2.华兰基因工程有限公司质量控制部，河南新乡 453000；3.华兰生物工程股份有限公司血制研发部，河南新乡 453003

    DNA克隆技术在生物医学领域研究中应用广泛[1]。传统酶切连方法耗时长、耗费高、效率低，不能满足目前分子生物学发展需求[2-3]。为提高克隆技术连接效率，近年来开发出多种新方法[4-6]。其中，无缝克隆是新技术中的典型代表[7]，位点选择灵活、连接产物无冗余序列、连接效率高且简单快捷，受到广大研究者的青睐[8-17]。本研究对比三个厂家试剂盒价格、总克隆数和阳性克隆率，表明生工生物工程(上海)股份有限公司的无缝克隆试剂盒为最佳选择。

    1 材料与方法

    1.1 供试品

    pUC57-HNB2M11由金斯瑞生物科技有限公司合成，DH5a感受态购自生工生物工程(上海)股份有限公司，pET-26b载体由华兰生物工程股份有限公司保存。

    1.2 材料

    蛋白胨购自OXOID，酵母粉购自BD，DH5a感受态、琼脂粉购自生工生物工程(上海)股份有限公司，Nco I、Xho I购自 Takara，Gene JET Plasmid Miniprep Kit购自 Thermo，EasyPfu DNA Polymerase购自 TransGen Biotech，Ready-to-Use Seamless Cloning Kit购自生工生物工程(上海)股份有限公司，Kit A购自厂家A，KitB购自厂家B。

    1.3 仪器设备

    摇床(HYG-A)购自太仓实验设备厂 ......