单晓英 张祥华 王 岩

    山东省莒县中医医院儿科，山东莒县 276500

    急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一种恶性造血系统疾病，其特征在于骨髓祖细胞/前体分化受损和不受控制的克隆扩增，导致骨髓衰竭和正常造血功能受损[1]。AML是成人中最常见的急性白血病，也是儿童中第二常见的白血病。目前，AML的临床治疗仍以联合化疗为主，但其总体缓解率有限，复发率也偏高。尤其是老年AML患者，确诊后的生存期仅5～10个月[2]。肿瘤细胞的增殖与凋亡涉及到细胞基因组学的改变，其中，长链非编码RNA(long non-coding RNAs，LncRNAs)在此过程中发挥着重要作用。因LncRNAs可通过表观遗传学[3]、转录[4]以及转录后调控[5]介导基因的表达调控，近年来成为药物抗肿瘤作用机制研究的热点。其中，LncRNA-H19是最早报道的LncRNAs之一，其在大多数成体组织中不表达或低表达，然而，在脑、呼吸系统、消化系统、泌尿系统及生殖系统肿瘤中的表达均呈上升趋势，且其致癌作用机制因肿瘤不同而存在差异[6]。冬凌草是一种唇形科香茶菜属植物，产于贵州、四川、广西等地区，在传统上常用于清热解毒、消炎止痛、活血等。冬凌草富含贝壳杉烷二萜、三萜、甾体以及挥发油等成分，尤其是其主要活性成分冬凌草甲素在食管癌[7]、胃癌[8]、结直肠癌[9]、骨肉瘤[10]等恶性肿瘤中表现出良好的抗癌作用且无明显的毒副作用，因此引起了国内外研究者的广泛关注[11]。本研究旨在观察冬凌草甲素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制是否与调控LncRNA-H19相关。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株与主要试剂

    人急性髓系白血病细胞HL-60购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；冬凌草甲素(纯度>98%)购于北京环宇生物技术有限公司，用二甲基亚砜配制成10mmol/L母溶液；胎牛血清、RPMI-1640培养基购于美国Gibco公司；青霉素、链霉素、Lipofectamine 2000、Trizol、RT-PCR试剂盒购于美国Invitrogen公司；CCK-8细胞增殖检测试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司；Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒购于美国BD公司；碘化丙锭染料购于美国Sigma公司；兔抗人Caspase-3、兔抗人Bax、兔抗人Bcl-2、兔抗人LC3-Ⅱ、兔抗人Beclin-1单克隆抗体购于美国Cell Signaling公司。

    1.2 主要仪器 ......