王文康 李恒昌 陈廷凤

    广州市第一人民医院麻醉科，广东广州 510180

    有研究显示，神经病理性疼痛的发生及发展与谷氨酸及其受体相关，脊髓中的谷氨酸受体与感觉相关[1-3]。TRESK介导的神经元细胞凋亡与神经病理性疼痛发生有关[4-6]，现研究TRESK介导的mTOR信号通路对SD大鼠脊髓神经元细胞凋亡的影响。且研究认为谷氨酸作为诱导的脊髓神经元和胶质细胞与机体发生慢性疼痛具有相关性[7-8]，本研究于2018年1月至2020年1月就TRESK介导mTOR信号通路对SD大鼠脊髓神经元细胞凋亡的影响进行讨论，报道如下。

    1 材料及方法

    1.1 SD大鼠脊髓原代神经元细胞培养

    在37℃无菌环境中，将新生不超过24 h的SD大鼠(性别不限，体重5～6 g，广东医科大学实验动物中心)脊髓分离并剪碎，以0.25%的胰蛋白酶(上海晶抗生物工程有限公司，JLC2128)制成单细胞悬浮液，经过滤、离心、沉淀、稀释后于经多聚赖氨酸处理过的24孔板(美国Sigma公司)进行接种。24 h后更换为饲养培养液。4 d后加入4 μg/ml的阿糖胞苷(美国Sigma公司)，处理2 d后，将阿糖胞苷更换为无阿糖胞苷(美国Sigma公司)，7 d后进行相关因子的测量。

    1.2 方法

    100例SD大鼠的脊髓原代神经元细胞随机分为4组，每组各25例。A组采用TRESK siRNA进行转染，以最终浓度为20 nmol /L的mTOR特异性抑制剂进行预处理20 min，再使用100 μmol /L的谷氨酸进行24 h处理；B组用20 nmol /L的mTOR特异性抑制剂预处理后，进行24 h的100 μmol /L谷氨酸处理；D组仅使用100 μmol /L的谷氨酸进行24 h处理；C组不进行任何处理。

    1.3 测定方法

    1.3.1 脊髓神经元cleaved Caspase3、Bax水平的测定 用Western blot法来测定Caspase3、Bax的水平 ......