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    固安鼎泰海规生物科技有限公司，河北廊坊 065500

    NMM[携带编码肿瘤基因纽约食管鳞状细胞癌1(NY-ESO-1)、黏蛋白1(MUC-1)、黑色素瘤抗原家族A3(MAGE-A3)]肿瘤治疗性DNA 疫苗裸质粒注射液(简称“NMM 抗肿瘤DNA 疫苗”[1])属于重组生物制品，系采用大肠杆菌作为受体菌，将带有编码肿瘤相关基因的pNMM 质粒转化进入菌体后制备工程菌，通过发酵、SDS 碱裂解菌体后粗纯、精纯等步骤而制得的质粒DNA，主要用来治疗黑色素瘤、乳腺癌、淋巴癌、皮肤癌等体表实体瘤。由于该产品源自大肠杆菌发酵，生产过程中会有大肠杆菌菌体蛋白质残留，宿主细胞蛋白质(host cell proteins，HCPs)属于异源蛋白，成分复杂，包括宿主细胞的结构蛋白以及宿主细胞分泌的催生长因子[2]，且会因生产过程及纯化工艺的不同而发生变化。宿主菌菌体蛋白残留是影响生物制品安全性的主要因素之一，产品中残存的菌体蛋白等杂质可能是引起机体过敏反应的重要原因[3-4]，现行版《中华人民共和国药典》[5]中规定对依托大肠杆菌发酵的重组生物制品中宿主菌蛋白质残留量应不高于0.1%，对于依托酵母菌生产的重组生物制品，宿主菌蛋白质残留量的控制更为严格(应不高于0.05%)。

    目前宿主细胞蛋白质的分析检测技术分为定性和定量两种方式，其中定性的检测方法有二维电泳法(2D-PAGE)[6]，而定量检测的方法有酶联免疫法[2，7]、毛细管电泳法等[8]。本研究选用美国Cygnus 公司的大肠杆菌宿主细胞ELISA 检测试剂盒进行检测，该试剂盒带有用抗大肠杆菌菌体蛋白抗体包被的酶标板，其抗体是由包含如DH-5α、BL21、K12、JM109 等多种大肠杆菌菌体混合溶菌液反应产生的。本品生产使用的基因工程菌为XL10-Gold，为大肠杆菌K12 系菌株中的一个变种，因此可以使用该试剂盒进行大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定。该方法具有简洁、快速、灵敏度高等优点，具有较广泛的应用性。本研究拟从专属性、检测限、定量限、线性、精密度、准确度、耐用性等方面进行验证，以便确认该方法是否适用于NMM 抗肿瘤DNA 疫苗原液中宿主菌蛋白质残留量的检测。

    1 仪器与试剂

    MB-580 型多功能酶标仪及数据分析软件(深圳汇松科技发展有限公司)；振荡器。

    大肠杆菌宿主细胞ELISA 检测试剂盒(美国Cygnus)；原液空白溶剂(DNA 溶解液 ......