郭炽星(通讯作者) 蒋敏慧 黎敬忠

    (广州市番禺区慢性病防治站检验科 广东 广州 511400)

    1.研究背景

    WHO最新统计数据表明，全球目前约有20亿人感染结核分支杆菌，占全世界总人口的近1/3，其中活动性肺结核患者达2000万[1-3]。平均每年新发病例约600万，绝大部分位于发展中国家。结核病的死亡率位于各类疾病之首，其广泛流行对全球经济、社会发展及进步构成严重威胁[4]。我国是世界上22个结核病高负担国之一，肺结核年新发患者和患病总人数仅次于印度，居世界第2位。目前，我国结核杆菌感染者约5亿，活动性结核患者约500万，其中涂阳患者150万。据统计显示，有近60%的传染性肺结核患者未被发现，使传染源不能得到有效控制[5]。早发现、早诊断、选取敏感的抗结核药物联合治疗是有效控制结核病蔓延的关键手段。

    近年来，随着生物、化学、软件开发领域的交叉发展，数据库的积累，越来越多的新型诊断方法开始走进临床诊断，尤其是蛋白标志物的诊断，其中High Performance Liquid Chromatography Mass Spectrometry (HPLCMS)已经成为一种逐渐被认可的疾病标志物筛查方法[6-7]。本文通过LC-MS的方法对近年来广州地区结核分枝杆菌耐药状况以及耐药结核分枝杆菌的蛋白指纹图谱进行分析，从而为制定本地区结核病预防、诊断、控制策略提供一定的理论依据。

    2.实验部分

    2.1 菌株来源

    选取2016年8月-2017年3月在广州市番禺区慢病防治站检查疑似肺结核的住院患者100例。其中男性患者65例，女性患者35例，评价年龄为42.6岁。从100例患者痰液中分离出全部菌株，菌株进行菌型鉴定和药敏试验。菌型鉴定和药敏试验：分枝杆菌培养、鉴定和耐药性检测按照《结核诊断实验室检验规程》进行，药敏试验采用比例法进行确认。

    2.2 材料

    缓冲液：50mM NH4HCO3(pH7.8)；碘乙酰胺溶液：55mM碘乙酰胺，50mM NH4HCO3；50%乙腈溶液：50mM NH4HCO3，50%乙腈；酶解液：12.5ug/mL胰酶，20mM NH4HCO3；色谱级乙腈，甲醇，异丙醇，甲酸购自CNW公司。DTT，IAM，NH4HCO3，Trypsin购自生工生物 ......