魏蔚 杨淑改

    (1 新乡医学院 河南 新乡 453000)

    (2 平顶山学院 河南 平顶山 467000)

    随转录组测序技术的发展，大多数恶性肿瘤基因组DNA表现为缺乏蛋白质编码能力，从而导致加工转录过程更明确。长链非编码RNA是最近发现的一类主要类型的非编码RNA，其长度超过200个核苷酸[1]。近年来，不断有新出现的证据表明，一些lncRNA如PVT1在调节基因表达和调控基因表达方面发挥重要作用。通过表观遗传调控的生物学功能，包括甲基化，乙酰化和泛素化等相关作用[2]。

    PVT1位于12q14.1上的基因位点，长度为1567nt，已被发现在多种人类恶性肿瘤中存在过表达情况。在非小细胞肺癌(NSCLC)中，PVT1的表达增加通过与表观遗传蛋白相互作用调节下游靶标的转录[3]。转化生长因子β(TGF-β)被定义为致癌蛋白，可以一定程度上促进肿瘤生长和转移，使其成为恶性肿瘤的预后和治疗靶点。此前，证明TGF-β在肝细胞癌中通过H3K27修饰进行表观遗传学调节[4]。然而，PVT1在结肠癌中与TGF-β的相互作用不甚清楚。

    本实验通过假设lncRNA PVT1通过TGF-β通路蛋白表达影响结肠癌细胞的生物学行为。为了验证这一假设，首先明确PVT1在结肠癌组织和细胞系中的表达水平。通过进行体外和体内实验测定，进一步研究了PVT1在结肠癌的生物学功能相关性

    1.材料和方法

    1.1 细胞株及相关材料

    人结肠癌细胞株HT-29，SW 480，SW620及RKO购买于上海中科院，RPMI-1640培养基和胰酶购买于美国Gibco公司；胎牛血清和双抗购买于美国海克隆公司；PBS磷酸盐缓冲液购买于美国Gibco公司。

    1.2 组织样品

    结肠癌组织收集2018年1月—8月经病理检查确诊为结肠癌组织50例。肿瘤组织离体后，去除血迹，放入4%多聚甲醛中固定。

    1.3 miRNA提取和qPCR试验

    使用来自TRIzol试剂按照制造商的说明分离来自组织或细胞系的miRNA ......