谭智文 段扬 朱立新(通讯作者)

    (南方医科大学珠江医院脊柱外科 广东 广州 510280)

    前列腺癌是最常见的恶性肿瘤之一，它在男性患者中的致死率在全球范围内列第二位[1]。在我国，前列腺癌是70岁以上人群中病死率最高的泌尿系肿瘤，严重影响男性的健康[2]。骨转移是晚期前列腺癌的标志，而骨转移导致的相关并发症是患者死亡的主要原因[3]。因此，前列腺癌骨转移在临床治疗中仍是个棘手的问题。在前列腺癌的进展中，前列腺肿瘤微环境(prostate tumor microenvironment, TEM)扮演着重要的角色。实验已揭示了TEM中的细胞能使肿瘤细胞恶性增强，而肿瘤细胞也能反过来使TEM的恶性表型增加[4]。TEM主要由细胞外基质和一些非恶性的基质细胞组成。癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)是其中一类异质性较大的细胞群体，CAFs是基质改变的关键因子，能促进前列腺癌的进展和转移[5]。骨转移的病变是由于骨形成和骨破坏的平衡被打破，因此破骨细胞和成骨细胞都参与了这个过程。近年来已有研究表明在肿瘤骨转移中破骨细胞的活性发挥着重要的作用[6]。而miR-214-3p的表达与破骨细胞的活性密切相关[7]。目前国内外的研究主要集中在前列腺癌细胞对破骨细胞的影响上，此前有研究人员提出前列腺癌细胞的培养上清液能促进破骨细胞分化[8]。而有关前列腺CAFs对破骨细胞作用的研究则比较少。我们在本研究中分离鉴定了前列腺癌细胞和前列腺CAFs，并观察它们对破骨细胞形态和活性等方面的影响。

    1.资料与方法

    1.1 主要试剂

    RPMI-1640(Gibco)；胎牛血清(Biological Industries)；双抗(Gibco)；淋巴细胞分离液(Sigma)；M-CSF和RANKL(Sino Biological)；RNA提取并PCR试剂盒(Takara)；MTT(Beyotime)；抗PSA抗体、抗α-SMA抗体、抗Vimentin抗体(Abcam)；TRAP染色盒(Sigma)；引物购自上海生工公司。

    1.2 前列腺癌组织来源

    选择于南方医科大学珠江医院手术室进行腹腔镜下根治性前列腺癌切除术的3例患者，在术前未接受放化疗。当切除前列腺癌组织后，由病理科医生选取避开坏死区的肿瘤组织，一半马上作冰冻切片在显微镜下观察，确定为癌组织或癌基质组织后，另一半即用来提取前列腺癌细胞和前列腺CAFs进行原代培养 ......